目的 構建轉化生長因子 β3（transforming growth factor β3，TGF-β3）的腺病毒載體，并通過腺病毒載體將TGF-β3基因轉染骨髓間充質干細胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs），使其在細胞內得到表達。方法 將人TGF--3質粒定向克隆進入穿梭質粒pAdTrackCMV中，與pAdEasy1共同轉入細菌并重組，獲得TGF-β3重組腺病毒質粒，用脂質體法導入包裝細胞HEK293中，48～96 h后熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達。取1 月齡新西蘭大白兔5 只，取其脛骨骨髓。采用密度梯度離心法分離純化MSCs，并進行傳代。取傳至第3代細胞采用TGF-β3腺病毒載體轉染，10 h后熒光顯微鏡觀察綠色熒光表達，轉染TGF-β3重組腺病毒4d后的MSCs用免疫細胞化學方法觀察TGF-β3在細胞內的表達。結果 pAdEasy-TGF-β3轉染 HEK293 細胞48~96 h后，熒光顯微鏡可見明顯的綠色熒光表達。 兔骨髓分離培養(yǎng)10 d 后，培養(yǎng)MSCs融合達70％~80%、貼壁緊密，細胞形態(tài)均一，似成纖維細胞；14 d 完成原代細胞培養(yǎng)。TGF-β3重組腺病毒轉染MSCs 17 h 后，熒光顯微鏡下出現(xiàn)少量綠色熒光，48~72 h 熒光加強，熒光與MSCs輪廓一致。免疫細胞化學觀察，轉染TGF-β3重組腺病毒MSCs胞漿內有棕黃色陽性顆粒表達。結論 TGF-β3基因重組腺病毒載體的成功構建并在MSCs內的表達，為創(chuàng)傷愈合的基因治療提供了研究基礎。
引用本文： 邱林,金先慶,羅小輯,丁幸坡. 轉化生長因子β3基因轉染兔骨髓間充質干細胞的實驗研究. 中國修復重建外科雜志, 2006, 20(9): 940-943. doi: 復制