目的 建立分離、培養(yǎng)成人外周血來源的間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的方法，觀察成人血源性MSCs體外成骨潛能。方法 抽取成年志愿者外周靜脈血30份，每份15 ml。用淋巴細胞分離液（密度為1.077 g/ml）梯度離心，取單個核細胞在含有20%胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴增MSCs，流式細胞儀分析MSCs表型。第2次傳代培養(yǎng)時在培養(yǎng)液中添加成骨誘導(dǎo)因子（地塞米松、β-磷酸甘油、維生素C和1，25二羥維生素D3）。第5代傳代細胞檢測堿性磷酸酶、Ⅰ型膠原(collagen type Ⅰ, Col Ⅰ)、骨鈣素(osteocalcin, OC)和骨粘連蛋白(osteonectin, ON)表達，連續(xù)培養(yǎng)1個月后檢測鈣結(jié)節(jié)形成情況。結(jié)果 成人外周血中存在MSCs，集落形成率為0.27±0.22/106單個核細胞，表達CD44、CD54、CD105和CD166，而不表達與造血系相關(guān)的CD14、CD34、CD45及內(nèi)皮細胞特異的CD31。地塞米松、β-磷酸甘油、維生素C和1，25二羥維生素D3可作用于傳代培養(yǎng)的血源性MSCs，表現(xiàn)為堿性磷酸酶染色陽性細胞增多，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptionpolymerase chain reaction, RT-PCR）產(chǎn)物電泳條帶顯示Col I、OC和ON表達，鹽酸四環(huán)素?zé)晒鈽擞涀C實有鈣結(jié)節(jié)形成。結(jié)論 建立的成人MSCs分離、培養(yǎng)條件可分選出外周血貼壁生長的細胞中一組獨特的細胞群。成人血源性MSCs具有較強的體外成骨潛能，可望成為一種新的骨組織工程種子細胞。

引用本文： 曹聰,董英海,董宇啟,路麗明,崔磊,劉偉,曹誼林. 人血源性間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)與體外成骨研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2005, 19(8): 642-647. doi: 復(fù)制