目的探討體外篩選及鑒定人角朊干細(xì)胞(KSC)的方法. 方法利用KSC對細(xì)胞外基質(zhì)的快速黏附性,選擇不同時間黏附的細(xì)胞分為5、20和60分鐘3組,并以不進(jìn)行篩選的細(xì)胞作對照組.體外培養(yǎng)擴(kuò)增后,以KSC的相對特異性標(biāo)識分子β1整合素、角蛋白19(Ck19)的單克隆抗體,免疫組織化學(xué)方法對各組細(xì)胞進(jìn)行鑒定,利用圖像分析系統(tǒng)測平均灰度值.并用流式細(xì)胞儀、透射電鏡對各組細(xì)胞進(jìn)行檢測. 結(jié)果各組細(xì)胞在10～14天均有克隆形成,組間比較5分鐘組細(xì)胞生長較慢,但形成克隆較大,細(xì)胞體積較小.免疫組織化學(xué)β1整合素、Ck19在各組都有表達(dá),各組平均灰度值統(tǒng)計學(xué)分析顯示,β1整合素在5分鐘組的表達(dá)與另3組間有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt;0.05),Ck19的表達(dá)在5分鐘組與20分鐘組間無差異(P gt;0.05),60分鐘組與對照組間差異不顯著,而前兩組與后兩組之間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P lt;0.05).流式細(xì)胞儀檢測提示5分鐘組細(xì)胞大部分處于G1期,與其它3組有區(qū)別.透射電鏡顯示5分鐘組細(xì)胞體小,核漿比大,細(xì)胞器不成熟. 結(jié)論利用細(xì)胞外基質(zhì)篩選的5分鐘組細(xì)胞處于幼稚狀態(tài),并有強(qiáng)克隆形成能力,符合預(yù)期的KSC特點(diǎn),可利用KSC對細(xì)胞外基質(zhì)的快速黏附性對其純化篩選,同時利用β1整合素、Ck19的單抗加以鑒定.
引用本文： 董蕊,金巖,劉源. 人角朊干細(xì)胞體外篩選及鑒定的實(shí)驗研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2003, 17(5): 351-354. doi: 復(fù)制