目的 觀察脂質(zhì)體Lipofectamine TM 2000（LF2000）介導(dǎo)pSUPER為載體的缺氧誘導(dǎo)因子-1 alpha;（HIF-1 alpha;）特異性小干擾RNA重組質(zhì)粒（pSUPERsiHIF-1 alpha;）對(duì)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。方法 構(gòu)建重組質(zhì)粒pSUPER siHIF-1 alpha;。將48只7日齡C57BL/6J小鼠分為正常組、空白對(duì)照組、空載體組和基因治療組，每組12只。正常組小鼠在正?？諝庵酗曫B(yǎng)?？瞻讓?duì)照組、空載體組和基因治療組建立氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管模型。后空白對(duì)照組小鼠不再作任何處理。于出艙前1 d，空載體組小鼠玻璃體腔注射pSUPER 和LF2000脂質(zhì)體混合物1 mu;l，基因治療組小鼠玻璃體腔注射重組質(zhì)粒pSUPERsiHIF-1 alpha;和LF2000脂質(zhì)體混合物1 mu;l。采用熒光造影視網(wǎng)膜鋪片觀察各組小鼠視網(wǎng)膜血管形態(tài)變化；作病理切片，光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)各組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)；免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜中HIF-1 alpha;、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的蛋白表達(dá)；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜中HIF-1 alpha; mRNA的表達(dá)。結(jié)果 視網(wǎng)膜鋪片熒光顯微鏡觀察顯示，正常組小鼠整個(gè)視網(wǎng)膜血管分布呈均勻網(wǎng)狀；空白對(duì)照組、空載體組小鼠視網(wǎng)膜中周部可見(jiàn)大片無(wú)灌注區(qū)及新生血管叢，伴熒光滲漏；基因治療組無(wú)灌注區(qū)及新生血管叢空白對(duì)照組、空載體組明顯減少，視網(wǎng)膜血管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)基本正常。光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組、空載體組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)較正常組明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5850.016，P＜0.05）；基因治療組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)較空白對(duì)照組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3012.469，P＜0.05）。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 顯示，HIF-1 alpha;蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞核中，VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞漿中。正常組小鼠視網(wǎng)膜中HIF-1 alpha;蛋白表達(dá)均呈陰性，VEGF蛋白表達(dá)呈弱陽(yáng)性；空白對(duì)照組、空載體組小鼠HIF-1 alpha;、VEGF蛋白表達(dá)均呈陽(yáng)性；基因治療組小鼠視網(wǎng)膜中HIF-1 alpha;、VEGF蛋白表達(dá)均呈弱陽(yáng)性。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組、空載體組較正常組小鼠視網(wǎng)膜中HIF-1 alpha; mRNA表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3102.326，P＜0.05）。基因治療組小鼠視網(wǎng)膜中HIF-1 alpha; mRNA表達(dá)較空白對(duì)照組下調(diào)，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3336.425，P＜0.05）。結(jié)論 脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒pSUPERsiHIF-1 alpha;轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜可有效抑制氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的形成。
引用本文： 熊宇,夏曉波,蔣劍,宋偉濤. 脂質(zhì)體介導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)因子-1α特異性小干擾RNA重組質(zhì)粒對(duì)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用. 中華眼底病雜志, 2013, 29(3): 290-295. doi: 復(fù)制