目的 觀察雙孔鉀離子通道蛋白（TRAAK K2P）持續(xù)性激動劑利魯唑?qū)κ宥』^氧化氫（t-BHP）誘導體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮（hRPE）細胞氧化損傷的作用，探討其作用機制。方法 原代培養(yǎng)hRPE細胞，取第3~5代細胞進行實驗。將hRPE細胞分為正常對照組、模型組和2、5、10、20 mu;mol/L加藥組及利魯唑單藥組。采用噻唑藍比色法檢測各組細胞存活率，以此確定利魯唑最佳干預濃度進行后續(xù)實驗。將hRPE細胞分為正常對照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組，采用流式細胞儀檢測各組細胞的正常細胞率和早期凋亡率；倒置顯微鏡觀察各組細胞的形態(tài)變化；激光共聚焦顯微鏡觀察各組細胞核的形態(tài)變化和TRAAK K2P表達。結(jié)果與模型組比較，僅有10 mu;mol/L模型加藥組細胞存活率明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.84，P＜0.05）。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，正常對照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組正常細胞率分別為（97.6 plusmn;1.3）%、（70.3 plusmn;7.0）%、（86.9 plusmn;5.2）%、（93.9 plusmn;1.5）%；正常對照組、模型加藥組及利魯唑單藥組分別與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（t=7.53、4.59、6.49，P＜0.05）；模型加藥組與正常對照組、利魯唑單藥組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（t=2.94、1.91，P＞0.05）。細胞早期凋亡率分別為（1.37 plusmn;0.98）%、（25.50 plusmn;8.02）%、（1.20 plusmn;0.72）%、（5.20 plusmn;2.00）%，正常對照組、模型加藥組及利魯唑單藥組分別與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（t=7.07、7.13、5.94，P＜0.05）；模型加藥組與正常對照組、利魯唑單藥組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（t=0.06、1.18，P＞0.05）。正常對照組及利魯唑單藥組細胞呈梭形或多角形，細胞核呈均勻規(guī)則的橢圓形；模型組部分細胞腫脹、變圓、漂浮及細胞核固縮；模型加藥組個別細胞腫脹、變圓和細胞核固縮。正常對照組、模型組、模型加藥組及利魯唑單藥組TRAAK K2P表達分別為0.040 plusmn;0.003、0.041 plusmn;0.001、0.049 plusmn; 0.001、0.055 plusmn;0.001。4組間TRAAK K2P表達比較，模型組與正常對照組間差異無統(tǒng)計學意義（t=0.80，P＞0.05）；模型加藥組、利魯唑單藥組與正常對照組間差異均有統(tǒng)計學意義（t=7.40、12.70，P＜0.05）。結(jié)論 利魯唑能在早期凋亡階段保護hRPE細胞免受t-BHP誘導的氧化損傷。利魯唑上調(diào)TRAAK K2P蛋白在細胞中的表達可能是其機制之一。
引用本文： 沈朝蘭,李楚,朱曉波,鄭文斌,夏仁春. 雙孔鉀離子通道激動劑利魯唑?qū)κ宥』^氧化氫誘導的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞氧化損傷的作用. 中華眼底病雜志, 2013, 29(4): 400-405. doi: 復制
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