目的 觀察15-脂氧合酶-1（15-LOX-1）基因轉(zhuǎn)移對氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。 方法 7日齡C57BL/6J小鼠96只，隨機(jī)分為正常對照組、氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（OIR）模型組、基因治療組和空白載體組。將小鼠與哺乳母鼠共同置于氧濃度為（75 plusmn;2）%的氧箱內(nèi)飼養(yǎng)5 d后轉(zhuǎn)移至正常環(huán)境中飼養(yǎng)5 d，建立OIR模型。小鼠出生后第12天基因治療組玻璃體腔注射攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)和小鼠15-LOX-1基因的重組腺病毒（Ad-15-LOX-1-EGFP）載體 1 mu;l；空白載體組注射等量攜帶EGFP的重組腺病毒（Ad-EGFP）載體。注射后第2天行視網(wǎng)膜鋪片熒光顯微鏡觀察EGFP的表達(dá)。注射后第5天行免疫熒光染色法、實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白免疫印跡法檢測15-LOX-1-基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜的表達(dá)；視網(wǎng)膜鋪片觀察視網(wǎng)膜血管變化，測量視網(wǎng)膜無灌注區(qū)和新生血管的相對面積；石蠟切片蘇木精伊紅染色并計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核。結(jié) 果 Ad-15-LOX-1-EGFP注射第2天，視網(wǎng)膜鋪片上觀察到EGFP的表達(dá)。免疫熒光染色結(jié)果顯示,15-LOX-1基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜主要表達(dá)在外叢狀層、內(nèi)核層和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層。基因治療組15-LOX-1蛋白和mRNA表達(dá)水平明顯高于OIR模型組和空白載體組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t蛋白表達(dá)水平=22.74、24.13，tmRNA表達(dá)水平=12.51、13.40；P＜0.01)；基因治療組視網(wǎng)膜無灌注區(qū)和新生血管面積較OIR模型組和空白載體組顯著減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t無血管區(qū)面積=16.22、14.31，t新生血管面積=9.97、9.07；P＜0.01)；基因治療組中突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核與OIR模型組和空白載體組比較明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.25、11.62，P＜0.01)。結(jié)論 15-LOX-1基因轉(zhuǎn)移不僅可以減少氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜無灌注區(qū)面積,并且對視網(wǎng)膜新生血管有顯著的抑制作用。
引用本文： 黎智,賀濤,杜珂,陳長征,邢怡橋. 15-脂氧合酶-1基因轉(zhuǎn)移抑制小鼠視網(wǎng)膜新生血管的實(shí)驗(yàn)研究. 中華眼底病雜志, 2013, 29(4): 406-410. doi: 復(fù)制