目的  觀察大鼠玻璃體腔注射阿克苷的安全性及其對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞（RGC）保護作用。方法  190～210 g清潔級健康雌性Sprague Dawley大鼠50只納入研究。其中，15只大鼠用于阿克苷玻璃體腔注射安全性研究。隨機分為實驗1、2、3組、對照組和空白對照組，每組3只大鼠。其中，實驗1、2、3組分別玻璃體腔注射1、2、5 mg/ml的阿克苷溶液5  mu;l；對照組玻璃體腔注射磷酸鹽緩沖溶液（PBS）5  mu;l；空白對照組不施加任何干預。1、2、3周后摘除眼球行冷凍切片，蘇木精-伊紅（HE）染色光學顯微鏡觀察視網(wǎng)膜結構，1、3周行超薄切片透射電子顯微鏡觀察視網(wǎng)膜超微結構。其余大鼠用于阿克苷對RGC保護作用研究。隨機分為手術A、B組，假手術C、D組和空白對照組。其中，手術組及假手術組各組均為8只大鼠，空白對照組3只大鼠，共35只。手術組大鼠在暴露視神經(jīng)后夾持視神經(jīng)10 s，假手術組大鼠僅暴露視神經(jīng)。手術A、B組分別經(jīng)玻璃體腔注射1 mg/ml阿克苷5  mu;l、PBS液5  mu;l；假手術C、D組分別經(jīng)玻璃體腔注射1 mg/ml阿克苷5  mu;l、PBS液5  mu;l；空白對照組不施加任何干預。1、2、4周后摘除眼球行冷凍切片，部分切片HE染色后光學顯微鏡觀察視網(wǎng)膜結構，計數(shù)RGC；部分切片行免疫組織化學二步法檢測生長相關蛋白43（GAP-43）表達，原位切口末端標記（TUNEL）法檢測RGC凋亡情況，計數(shù)RGC及陽性細胞數(shù)，計算細胞凋亡率。采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析。結果  阿克苷玻璃體腔安全性評價研究中，玻璃體腔注射后，大鼠角膜、前房、晶狀體、玻璃體腔及視網(wǎng)膜均未見異常。光學顯微鏡觀察顯示，第1、2、3周時視網(wǎng)膜各層結構排列整齊，未見明顯細胞凋亡、壞死特征及炎性細胞浸潤；RGC輕度水腫。透射電子顯微鏡觀察顯示，5、2 mg/ml阿克苷玻璃體腔注射后大鼠視網(wǎng)膜微結構發(fā)生明顯改變，1 mg/ml阿克苷注射后大鼠視網(wǎng)膜微結構輕微變化。阿克苷對RGC保護作用研究中，光學顯微鏡觀察顯示，手術組大鼠視網(wǎng)膜可見典型細胞凋亡表現(xiàn)，假手術組和空白對照組大鼠視網(wǎng)膜均未見明顯改變。玻璃體腔注射后1周，手術組RGC數(shù)較假手術組和空白對照組少，第2周繼續(xù)減少，手術A組RGC數(shù)多于手術B組，差異有統(tǒng)計學意義（F=26.206，P＜0.05）。第4周手術組RGC繼續(xù)減少，與第1、2周時手術組RGC數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=17.364，P＜0.05），各時間點假手術組間和假手術組與空白對照組間RGC數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義。GAP-43檢測結果顯示，玻璃體腔注射后1周，手術組大鼠視網(wǎng)膜積分吸光度（IA）值明顯高于其他組，差異有統(tǒng)計學意義（F=33.466，P＜0.05）；手術A、B組間IA值比較，差異無統(tǒng)計學意義。玻璃體腔注射后2周，手術組大鼠視網(wǎng)膜IA值略下降，且高于其他組；手術A組IA值高于手術B組，差異有統(tǒng)計學意義（F=14.391，P＜0.05）。玻璃體腔注射后4周，手術組大鼠視網(wǎng)膜IA值進一步下降；手術A組與其他組IA值比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=4.178，P＜0.05）。TUNEL檢測結果顯示，玻璃體腔注射后1周，手術組大鼠RGC凋亡明顯增加，與其他組比較，細胞凋亡率差異有統(tǒng)計學意義（F=15.365，P＜0.05）。玻璃體腔注射后2周，手術組RGC凋亡率均降低，手術A組大鼠細胞凋亡率低于手術B組，差異有統(tǒng)計學意義（F=12.767，P＜0.05）。玻璃體腔注射后4周，手術組大鼠細胞凋亡率明顯下降，與其他組比較，差異無統(tǒng)計學意義（F=2.057，P＞0.05）。假手術組和空白對照組細胞凋亡率在各時間點、各組間比較，差異無統(tǒng)計學意義。結論  阿克苷玻璃體腔注射具有可行性；1 mg/ml阿克苷對大鼠視網(wǎng)膜影響小，為其安全劑量。玻璃體腔注射阿克苷可增加GAP-43表達，對視神經(jīng)鉗夾傷大鼠RGC凋亡具有一定抑制作用。

引用本文： 王雙珠,曾勇,李燕. 阿克苷對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞保護作用及其安全性研究. 中華眼底病雜志, 2013, 29(6): 593-599. doi: 復制

版權信息： ?四川大學華西醫(yī)院華西期刊社《中華眼底病雜志》版權所有，未經(jīng)授權不得轉載、改編