目的 觀察色素上皮衍生因子（PEDF）對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜M uuml;ller細(xì)胞谷氨酰胺合成酶（GS）表達(dá)的影響。方法 將Sprague-Dawley大鼠分為模型組、模型對照組、PEDF干預(yù)組（干預(yù)組）、干預(yù)對照組，每組均為8只大鼠。模型組、干預(yù)組、干預(yù)對照組大鼠鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型。模型組大鼠不作任何干預(yù)，模型對照組為相同月齡的正常大鼠，干預(yù)組大鼠左眼玻璃體腔注射0.1 mu;g/ mu;l的PEDF 10 mu;l，干預(yù)對照組大鼠左眼玻璃體腔注射相同容積的磷酸鹽緩沖液。采用免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法檢測視網(wǎng)膜GS和白細(xì)胞介素-1 beta;（IL-1 beta;）的表達(dá)變化。將視網(wǎng)膜M uuml;ller細(xì)胞置于高糖環(huán)境下培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)干預(yù)組中加入100 ng/ml PEDF，空白對照組加入相同容積的培養(yǎng)液，24 h后通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）法和實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測PEDF對M uuml;ller細(xì)胞GS和IL-1 beta;表達(dá)的改變。流式細(xì)胞儀錨定蛋白-異硫氰酸熒光素和碘化丙啶（Annexin V-FITC-PI）雙染色法檢測100ng/mlPEDF對高糖狀態(tài)下M uuml;ller細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果 實(shí)時(shí)熒光PCR法從基因水平和免疫組織化學(xué)法從蛋白質(zhì)水平檢測均顯示，相對于模型對照組大鼠，模型組大鼠視網(wǎng)膜GS表達(dá)降低，而IL-1 beta;的表達(dá)升高，實(shí)時(shí)熒光PCR法：GS: t=4.23, P＜0.01；IL-1 beta;: t=16.73,P＜0.01；免疫組織化學(xué)法：GS:t=5.13,P＜0.01；IL-1 beta;: t=9.32, P＜0.01；干預(yù)組大鼠玻璃體腔注射PEDF 48 h后，IL-1 beta;的表達(dá)下降，GS的表達(dá)升高，與干預(yù)對照組比較，實(shí)時(shí)熒光PCR法：GS: t=3.87,P＜0.01；IL-1 beta;: t=3.61,P＜0.05；免疫組織化學(xué)法：GS:t=3.32, P＜0.05；IL-1 beta;: t=2.63, P＜0.05。在高糖環(huán)境下，通過實(shí)時(shí)熒光PCR法和Western bot 法檢測均顯示PEDF可以下調(diào)IL-1 beta;的表達(dá)，而上調(diào)GS的表達(dá)，與空白對照組比較，實(shí)時(shí)熒光PCR法：GS: t=2.89, P＜0.05；IL-1 beta;: t=3.37, P＜0.05；Western blot：GS: t=2.66, P＜0.05；IL-1 beta;: t=3.23, P＜0.05。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，PEDF可以抑制高糖環(huán)境下M uuml;ller細(xì)胞的凋亡，實(shí)驗(yàn)組凋亡率與空白對照組凋亡率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.21,P＜0.05)。結(jié)論 對于糖尿病大鼠，PEDF可能通過下調(diào)視網(wǎng)膜M uuml;ller細(xì)胞中IL-1 beta;的表達(dá)來上調(diào)GS的表達(dá)，從而改善谷氨酸循環(huán)，抑制神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡
引用本文： 沈璽,焦秦,鐘一聲,謝冰. 色素上皮衍生因子對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜谷氨酰胺合成酶表達(dá)的影響. 中華眼底病雜志, 2010, 26(2): 155-159. doi: 復(fù)制