目的 比較羧甲基化葡聚糖（CMD）磁性納米顆粒與脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000對人可溶性fms-樣酪氨酸激酶受體-1（sFlt-1）第2～4區(qū)基因片段的轉(zhuǎn)染率。方法 構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒編碼增強型綠色熒光蛋白質(zhì)粒（pcDNA3.1-EGFP）/sFlt-1（2～4），采用酶切、電泳及基因測序鑒定。將實驗分為磁顆粒組、脂質(zhì)體組和未轉(zhuǎn)染對照組進(jìn)行。轉(zhuǎn)染后24、48 h，倒置相差熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞綠色熒光分布；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞綠色熒光表達(dá)率；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法和免疫蛋白印跡（Western blot）法檢測sFlt-1(2～4)mRNA和蛋白表達(dá)；噻唑藍(lán)（MTT）比色法觀測細(xì)胞生長情況，計算各組細(xì)胞相對增長率（RGR）；Hoechst細(xì)胞核染色法觀察各組細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果 重組質(zhì)粒pcDNA3.1/sFlt-1（2～4）酶切產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳時出現(xiàn)大小為915 堿基對的條帶。流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，磁顆粒組平均轉(zhuǎn)染率為45％，脂質(zhì)體組平均轉(zhuǎn)染率21％；二者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.541，P＜0.05）。RT-PCR和Western blot觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染后48 h磁顆粒組細(xì)胞sFlt-1（2～4） mRNA和蛋白表達(dá)均明顯高于脂質(zhì)體組（t=2.454，2.398；P值均 lt;0.05）。轉(zhuǎn)染后24、48 h，磁顆粒組RGR與未轉(zhuǎn)染對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.436，P＞0.05），脂質(zhì)體組RGR與未轉(zhuǎn)染對照組及磁顆粒組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.412，2.545，P值均 lt;0.05）；磁顆粒組細(xì)胞凋亡率與未轉(zhuǎn)染對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.436，P＞0.05），與脂質(zhì)體組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.236，P＜0.05）。結(jié)論 CMD磁性顆粒較脂質(zhì)體LipofectamineTM 2000可獲得更高的sFlt-1(2～4) 基因片段轉(zhuǎn)染率。
引用本文： 江丹,吳強,賈麗麗,宋蓓雯,杜新華. 羧甲基葡聚糖磁性納米顆粒與脂質(zhì)體介導(dǎo)人可溶性fms-樣酪氨酸激酶受體-1的轉(zhuǎn)染比較. 中華眼底病雜志, 2010, 26(3): 231-235. doi: 復(fù)制