目的 觀察可溶性fms-樣絡(luò)氨酸激酶受體-1（sFlt-1）基因胞外第2~3區(qū)和2~4區(qū)對(duì)缺氧、高糖環(huán)境下視網(wǎng)膜血管通透性及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白酶B（PI3K/Akt）之間信號(hào)通路的影響。方法 構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒編碼增強(qiáng)型綠色熒光蛋白質(zhì)粒（pcDNA3-1-EGFP）/sFlt-1（2~3）和pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1（2~4），采用酶切、電泳及基因測(cè)序鑒定。將實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、缺氧組和高糖組進(jìn)行。以羧甲基化葡聚糖（CMD）納米磁顆粒為基因載體，分別攜帶兩種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染缺氧、高糖條件下培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）。采用分光光度計(jì)檢測(cè)各組兔視網(wǎng)膜血管對(duì)伊凡思藍(lán)（EB）染料的滲漏量。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫蛋白印跡（Western blot）法分別檢測(cè)各組細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路下游特異性磷酸化激酶Akt（p-Akt）mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果 缺氧組和高糖組注射轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清液后，視網(wǎng)膜血管EB滲漏量較正常對(duì)照組明顯增加（t=2.476，2.515；P值均 lt;0.01）。缺氧組和高糖組轉(zhuǎn)染了pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~3)和pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~4)后，視網(wǎng)膜血管EB滲漏量較未轉(zhuǎn)染明顯降低（t=2.598，2.679，2.386，2.732；P值均 lt;0.01）。缺氧組、高糖組HUVEC p-Akt mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組明顯上調(diào)（t=2.612，2.545；P值均 lt;0.01），轉(zhuǎn)染pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~3)和pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~4)后明顯下調(diào)（t=2.512，2.189，2.372，2.687；P值均 lt;0.01）。缺氧組和高糖組HUVEC p-Akt蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組明顯上調(diào)（t=2.376，2.712；P值均 lt;0.01），轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-EGFP/sFlt-1(2~3)和pcDNA3-1-EGFP/sFlt-1(2~4)后明顯下調(diào)（t=2.259，2.391，2.399，2.413；P值均 lt;0.01）。結(jié)論 sFlt-1受體胞外第2~3區(qū)和2~4區(qū)均可抑制缺氧、高糖環(huán)境下的視網(wǎng)膜血管通透性增高和PI3K/Akt通路的信號(hào)傳導(dǎo)。
引用本文： 吳強(qiáng),江丹,宋蓓雯,張敏,賈麗麗. 兩種fms-樣絡(luò)氨酸激酶受體-1基因片段對(duì)磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白酶B之間信號(hào)通路的影響. 中華眼底病雜志, 2010, 26(5): 454-458. doi: 復(fù)制