目的 觀察N-甲基-N亞硝酸脲（MNU）誘導(dǎo)的大鼠視網(wǎng)膜損傷過(guò)程中凋亡相關(guān)分子半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、bcl-2相關(guān)X蛋白（bax）和B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-xl（bcl-xl）在視網(wǎng)膜中的時(shí)空表達(dá)，探討其在MNU誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜損傷中的作用。方法 將鼠齡50 d的30只SPF級(jí)雌性SD大鼠隨機(jī)分為MNU模型組（24只大鼠）和正常對(duì)照組（6只大鼠）。模型組按40 mg/kg的劑量腹腔注射MNU建立MNU模型；正常對(duì)照組大鼠腹腔注射生理鹽水5ml/kg。模型組大鼠根據(jù)MNU注射后不同處死時(shí)間再分為1、3、7、10 d組，每小組各6只大鼠。正常對(duì)照組大鼠注射后3 d處死。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)各組視網(wǎng)膜中caspase-3、bax和bcl-xl的基因表達(dá)情況；免疫熒光技術(shù)檢測(cè)其在視網(wǎng)膜中的表達(dá)以及分布的變化，并用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）介導(dǎo)dUTP 缺口末段標(biāo)記（TUNEL）法檢測(cè)視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡的變化。結(jié)果經(jīng)病理學(xué)檢測(cè)確定造模成功。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，［與正常對(duì)照組相比（caspase-3和bax的相對(duì)吸光度（RA）值為62.45 plusmn;7.65、46.53 plusmn;4.41］，MNU模型1 d 組caspase-3（83.23 plusmn;8.11，P=0.009）和bax（72.73 plusmn;9.46，P=0.004）的表達(dá)均增強(qiáng)，3 d 組二者表達(dá)水平均最高 （caspase-3 RA =140.48 plusmn;18.40，P=0.000；bax- RA=102.36 plusmn;13.97，P=0.001），10 d 組caspase-3的表達(dá)水平（RA =47.32 plusmn;5.37，P=0.027）低于對(duì)照組，而10 d bax的表達(dá) （RA=48.27 plusmn;4.40，P=0.997）基本恢復(fù)至對(duì)照組水平；bcl-xl在4個(gè)造模組中的表達(dá)水平（1 d RA =63.29 plusmn;4.29，P=0.000；3d RA =79.83 plusmn;5.58，P=0.000；7 d RA=70.19 plusmn;4.42，P=0.000；10 d RA =66.05 plusmn;4.97，P=0.000）均高于正常對(duì)照組（RA =45.98 plusmn;3.06），3 d 組的表達(dá)水平最高。MNU誘導(dǎo)后1、3、7 d 組的bax/bcl-xl比值（1 d為1.15 plusmn;0.14，P=0.143；3 d為1.28 plusmn;0.16，P=0.001；7 d為1.17 plusmn;0.08，P=0.079）大于對(duì)照組（1.01 plusmn;0.09），其中3 d組的比值最大，但10 d 組bax / bcl-xl比值（0.73 plusmn;0.07，P=0.001）小于對(duì)照組。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，caspase-3、bax和bcl-xl的表達(dá)變化分別與其RT-PCR檢測(cè)結(jié)果一致；正常對(duì)照組在視網(wǎng)膜各層均未發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞，MNU 1 d 組的外核層可檢測(cè)到大量凋亡細(xì)胞核［凋亡率（AI）為34.96 plusmn;3.44，P=0.000］，3 d 組的外核層檢測(cè)的凋亡細(xì)胞最多（AI=76.97 plusmn;5.83，P=0.000），10 d 組未檢測(cè)到凋亡細(xì)胞。結(jié)論 MNU誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞凋亡可能是通過(guò)上調(diào)caspase-3及引起bax/bcl-xl表達(dá)失衡并明顯傾向促進(jìn)細(xì)胞凋亡造成的。

引用本文： 高楊 鄧新國(guó) 孫倩娜 何梅鳳 鐘志強(qiáng). 半胱氨酸蛋白酶3、bax和bcl-xl在N-甲基-N亞硝酸脲誘導(dǎo)的大鼠視網(wǎng)膜損傷后的表達(dá). 中華眼底病雜志, 2009, 25(2): 133-137. doi: 復(fù)制