目的 構(gòu)建在視網(wǎng)膜組織特異性表達(dá)的人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）165基因。 方法 用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法從BLAB/C鼠全基因組擴(kuò)增能在視網(wǎng)膜組織特異性表達(dá)的rho啟動(dòng)子，經(jīng)限制性內(nèi)切酶純化后克隆于質(zhì)粒pcDNA3.1+-VEGF165中，建立重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165，通過(guò)限制性內(nèi)切酶酶切分析及PCR鑒定篩選出正確重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165,由jetPEI介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，并通過(guò)免疫組織化學(xué)染色以及繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線檢測(cè)在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 在人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中，重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165比質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165的VEGF蛋白表達(dá)強(qiáng)，在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，兩者的表達(dá)量無(wú)明顯差別。 結(jié)論 pcDNA3.1+-rho-VEGF165載體的構(gòu)建為進(jìn)一步研究VEGF在視網(wǎng)膜新生血管形成中的致病機(jī)理提供基礎(chǔ)材料，并為進(jìn)一步建立視網(wǎng)膜特異性表達(dá)VEGF轉(zhuǎn)基因鼠模型建立了基礎(chǔ)。 (中華眼底病雜志,2005,21:106-109)
引用本文： 呂秀蘭,呂林,李永浩,張靜琳,李石毅. 視網(wǎng)膜特異性表達(dá)人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 基因載體的構(gòu)建. 中華眼底病雜志, 2005, 21(2): 106-109. doi: 復(fù)制