目的 探討牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（ bovine retinal endothelial cells, BREC ）和周細(xì)胞（bovine retinal pericytes, BRP）的體外選擇性培養(yǎng)方法。 方法 結(jié)合視網(wǎng)膜微血管的消化分離，采用含10％人血清、100 μg/ml 肝素（Heparin）的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle′s medium, DMEM)和含20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基分別選擇性培養(yǎng)BREC和BRP。通過(guò)熒光顯微鏡觀察乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low density lipoprotein, Dil-Ac-LDL)吞噬情況并應(yīng)用Von Willebrand因子抗體通過(guò)免疫組織化學(xué)方法鑒定BREC；以及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白抗體免疫組織化學(xué)鑒定BRP。 結(jié)果 通過(guò)選擇性培養(yǎng)獲得的BREC和BRP的純度達(dá)到98％以上，并能連續(xù)傳代。BREC早期似小鯉魚(yú)狀聚集在微血管碎片周圍，呈片狀鵝卵石樣單層生長(zhǎng)，存在接觸性抑制；周細(xì)胞多散布在距血管碎片稍遠(yuǎn)處，形狀不規(guī)則，呈無(wú)接觸性抑制的生長(zhǎng)。BREC可吞噬Dil-Ac-LDL，細(xì)胞漿內(nèi)有熒光表達(dá) ；消化傳代后BREC中Von Willebrand因子表達(dá)陽(yáng)性，而α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)陰性；BRP的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)陽(yáng)性，而Von Willebrand因子表達(dá)陰性。 結(jié)論 選擇性培養(yǎng)基的應(yīng)用和培養(yǎng)皿的處理，可分別獲得較高純度的BREC和BRP，簡(jiǎn)單且具有良好的重復(fù)性，無(wú)需額外步驟來(lái)去除BREC中混雜的BRP。 （中華眼底病雜志，2004，20：23-26）
引用本文： 夏欣,許迅,顧青. 牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞的體外培養(yǎng). 中華眼底病雜志, 2004, 20(1): 23-26. doi: 復(fù)制