• 貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽外科（貴州貴陽 550004）;

目的 　探討以2-乙酰氨基芴（2-AFF）灌胃與2/3肝切除法聯(lián)合運(yùn)用建立大鼠肝卵圓細(xì)胞增殖模型的適宜劑量，并探討肝卵圓細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)方法。
方法 　將174只Wistar大鼠隨機(jī)分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組（各30只）、未處理組（24只）和生理鹽水組（30只）。4個(gè)實(shí)驗(yàn)組大鼠分別給予5、10、15及20mg/（kg ? d） 2-AAF灌胃（分別對應(yīng)第1、2、3及4實(shí)驗(yàn)組），于第5天行2/3肝切除，術(shù)后繼續(xù)灌胃至處死大鼠；生理鹽水組大鼠以生理鹽水灌胃，其余操作同實(shí)驗(yàn)組；未處理組大鼠不做任何處理。6組分別于肝切除術(shù)后第4、8、12及16天各隨機(jī)處死6只大鼠，取肝組織行HE染色和免疫組化染色，觀察肝卵圓細(xì)胞的增殖情況〔第4天時(shí)同時(shí)檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平〕；并采用二步膠原酶灌注結(jié)合Percoll密度梯度離心法對大鼠肝卵圓細(xì)胞進(jìn)行分離和培養(yǎng)。
結(jié)果 　肝切除術(shù)后第4天，未處理組、生理鹽水組、第1、2、3及4實(shí)驗(yàn)組大鼠的存活率分別為100% （24/24）、93% （28/30）、93% （28/30）、90% （27/30）、90% （27/30）及80% （24/30）。肝切除后第4天，與未處理組及生理鹽水組比較，第2、3和4實(shí)驗(yàn)組大鼠的血清ALT及AST水平均升高（P＜0.05）。HE染色結(jié)果顯示，第2、3及4實(shí)驗(yàn)組大鼠的肝組織均出現(xiàn)不同程度的肝損傷，其中第3和第4實(shí)驗(yàn)組均可見明顯的肝卵圓細(xì)胞增殖反應(yīng)；免疫組化染色結(jié)果顯示，第2、3及4實(shí)驗(yàn)組卵圓細(xì)胞標(biāo)志6 （OV-6）表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)在術(shù)后第4、8、及12天，隨2-AAF劑量的增加逐漸升高，與2-AAF間呈劑量-效應(yīng)關(guān)系（P＜0.05）。大鼠肝卵圓細(xì)胞進(jìn)行體外分離和培養(yǎng)后，經(jīng)OV-6免疫組化染色鑒定，有80%的細(xì)胞表達(dá)呈陽性。
結(jié)論 　聯(lián)合運(yùn)用15 mg/（kg ? d） 2-AFF灌胃加2/3肝切除，于術(shù)后第12天，有效誘導(dǎo)了肝卵圓細(xì)胞的增殖，且造模大鼠的耐受性較好、死亡率低。采用二步膠原酶灌注結(jié)合Percoll密度梯度離心法較成功地分離出了大鼠肝卵圓細(xì)胞。

引用本文： 黃欽賢,李海洋,胡毅,宋建寧,董標(biāo),曹坤. 大鼠肝卵圓細(xì)胞增殖模型的建立和體外分離的實(shí)驗(yàn)研究△. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志, 2013, 20(10): 1100-1105. doi: 復(fù)制

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