• 1.四川大學(xué)華西醫(yī)院普外科（成都610041);;
  • 2.成都地奧制藥集團(tuán)有限公司新藥部（成都610041）;;
  • 通迅作者： 嚴(yán)律南;

目的構(gòu)建攜帶多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)全長基因的真核表達(dá)載體，并研究其在人肝癌細(xì)胞株HepG2中的表達(dá)特性。
方法雙酶切克隆質(zhì)粒pGEM-mrp1，獲得含mrp1全長的cDNA片段，再將此片段定向克隆到哺乳動物真核表達(dá)載體pCI-neo的多克隆位點，經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系HepG2/mrp1。RT-PCR檢測HepG2/mrp1細(xì)胞mrp1 mRNA表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測HepG2/mrp1細(xì)胞MRP的含量。
結(jié)果本實驗所構(gòu)建的攜帶mrp1全長基因的表達(dá)載體pCI-mrp1能在HepG2細(xì)胞中表達(dá)，形成穩(wěn)定的多藥耐藥細(xì)胞系HepG2/mrp1，其多藥耐藥性、MRP含量及mrp1 mRNA表達(dá)均較未轉(zhuǎn)染該載體的HepG2細(xì)胞顯著增加。結(jié)論將攜帶全長人多藥耐藥相關(guān)蛋白基因mrp1的載體導(dǎo)入人肝癌細(xì)胞株能夠建立高效、穩(wěn)定的多藥耐藥細(xì)胞株，為進(jìn)一步研究多藥耐藥的機(jī)理及逆轉(zhuǎn)多藥耐藥提供理想的細(xì)胞模型。

引用本文： 王新平,嚴(yán)律南,潘光棟,夏冬,張明滿,茍興華,趙蘭英. 多藥耐藥真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其生物學(xué)特性. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志, 2006, 13(2): 163-166. doi: 復(fù)制

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