目的 脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）是組織工程種子細胞的重要來源之一。探討低溫保存對hADSCs 體外生長特性及成骨分化潛能的影響，驗證凍存后的ADSCs 作為組織工程骨種子細胞的可行性。 方法 取自愿捐獻的經(jīng)脂肪抽吸術(shù)獲取人脂肪組織，采用膠原酶消化法分離hADSCs。取第2 代hADSCs 置于— 196℃液氮保存4 周后，37℃復(fù)蘇并測定細胞存活率。實驗分為兩組，實驗組為低溫保存的hADSCs，對照組為未經(jīng)低溫保存的hADSCs；均用成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)。采用DNA 定量（Hoechst33258 熒光比色法）測定細胞體外增殖活性，ALP 染色及茜素紅染色法測定ALP 活性和Ca2+ 含量，觀察低溫凍存對細胞成骨能力的影響。 結(jié)果 低溫凍存復(fù)蘇后的hADSCs 存活率為90.44% ± 2.62%。兩組細胞數(shù)量隨成骨誘導(dǎo)時間延長不斷增加，7 d 達平臺期；ALP 表達活性也不斷增加，于成骨誘導(dǎo)11 d 達平臺期，且2 周時ALP 染色均呈陽性；成骨誘導(dǎo)3 周時兩組茜素紅染色均呈強陽性反應(yīng)。兩組各時間點細胞數(shù)量、ALP 活性和Ca2+ 含量比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 低溫保存的hADSCs 體外生長及成骨能力未發(fā)生顯著變化，可以作為組織工程骨的種子細胞。
目的 磷酸鈣生物材料由于其優(yōu)良的生物相容性而具有廣闊的應(yīng)用前景，但傳統(tǒng)方法難以制備具有復(fù)雜形狀的支架。以快速成形方法制備磷酸鈣多孔陶瓷支架材料，并對其體外成骨性能進行初步研究。 方法 采用快速成形方法制備磷酸鈣多孔陶瓷支架材料（直徑10 mm、高度5 mm、孔徑800 μm），取Beagle 犬髂骨髓分離培養(yǎng)BMSCs，接種第3 代BMSCs 于支架材料上。將實驗分為4 組，A 組為成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的細胞/ 材料復(fù)合物組，B 組為未經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的細胞/ 材料復(fù)合物組，另設(shè)平皿成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)及常規(guī)培養(yǎng)為陽性對照組（C 組）及陰性對照組（D 組）。于接種后第1、3、7 天，利用DNA 定量檢測方法及ALP 定量、定性檢測方法檢測BMSCs 在支架材料上的增殖及ALP 的表達；并經(jīng)DiO 熒光染色后，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察BMSCs 在材料上的黏附生長情況。 結(jié)果 DNA定量結(jié)果表明，隨培養(yǎng)時間增加，C、D 組在第3 天時細胞生長進入平臺期；A、B 組細胞呈持續(xù)增長趨勢，細胞培養(yǎng)過程中增殖速度均略低于C、D 組，且未出現(xiàn)明顯的平臺期。DiO 熒光染色示，BMSCs 在以快速成形方法制備的磷酸鈣多孔陶瓷支架材料上黏附、生長狀態(tài)良好。ALP 染色示，隨培養(yǎng)時間延長，A、B 組支架上細胞染色均逐漸加深，A 組各時間點染色程度均明顯強于B 組。培養(yǎng)后第1、3 天，4 組ALP 表達均較低，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）；培養(yǎng)第7 天，各組ALP 表達均明顯升高，A 組比其他各組明顯高表達（P lt; 0.05），B 組及C 組均明顯高于D 組（P lt; 0.05）。 結(jié)論 快速成形的多孔磷酸鈣陶瓷具有良好的細胞相容性，BMSCs 與支架復(fù)合在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)可以進行成骨分化。因此通過快速成形技術(shù)制備的磷酸鈣多孔陶瓷是骨組織工程可選的細胞支架。