目的 克隆和構(gòu)建攜帶人低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）的Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α。方法 以缺氧的肝癌細(xì)胞株HepG2總RNA為模板，進(jìn)行RT-巢式PCR，獲得HIF-1α的cDNA，克隆入Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE2hyg，酶切重組子鑒定。將構(gòu)建好的PTRE-HIF-1α用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)入HepG2Tet-on細(xì)胞，在強(qiáng)力霉素的作用下，用RT-PCR及Western blot法鑒定重組質(zhì)粒的表達(dá)。結(jié)果 擴(kuò)增出HIF-1α的cDNA測(cè)序結(jié)果與Genbank記載完全一致，并成功克隆入PTRE2hyg，將反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α轉(zhuǎn)入HepG2Tet-on細(xì)胞，可以完整有效表達(dá)HIF-1α且受強(qiáng)力霉素的調(diào)控。結(jié)論 成功克隆和構(gòu)建攜帶HIF-1α基因的Tet-on基因表達(dá)系統(tǒng)反應(yīng)質(zhì)粒PTRE-HIF-1α，并證明其表達(dá)能在HepG2Tet-on細(xì)胞中受強(qiáng)力霉素調(diào)控。