目的 探討穩(wěn)定表達人骨形成蛋白-2(hBMP-2)基因的成纖維細胞是否具有體內(nèi)誘導(dǎo)成骨能力。方法 構(gòu)建重組真核表達載體pcDNA3-hBMP-2，在脂質(zhì)體介導(dǎo)下，將其導(dǎo)入NIH3T3細胞，通過G418篩選獲得陽性克隆，并繼續(xù)培養(yǎng)4周，用細胞原位雜交和免疫組織化學(xué)方法觀察hBMP-2基因在NIH3T3細胞內(nèi)的穩(wěn)定表達，并觀察了穩(wěn)定表達hBMP-2的成纖維細胞堿性磷酸酶(ALP)活性的變化，將穩(wěn)定表達hBMP-2的成纖維細胞植入裸鼠肌袋內(nèi)觀察其體內(nèi)誘導(dǎo)成骨作用。結(jié)果 成功構(gòu)建重組真核表達載體pcDNA3-hBMP-2，經(jīng)細胞原位雜交和免疫組織化學(xué)證實，轉(zhuǎn)染pcDNA3-hBMP-2后的NIH3T3細胞內(nèi)有大量hMP-2 mRNA的轉(zhuǎn)錄及其蛋白的穩(wěn)定表達，穩(wěn)定表達hBMP-2的成纖維細胞ALP活性顯著上升，植入裸鼠肌袋內(nèi)4周有大量軟骨形成。結(jié)論 穩(wěn)定表達hBMP-2的成纖維細胞具有體內(nèi)誘導(dǎo)成骨能力。
目的 探討和比較3種鈣磷陶瓷材料HA、TCP、HA/TCP復(fù)合重組人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)體內(nèi)異位成骨效果，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法 取35只3月齡Wistar大鼠，將復(fù)合rhBMP-2的3種鈣磷陶瓷材料(1∶1) 植于鼠背部肌袋內(nèi)，未復(fù)合rhBMP-2的上述3種單純陶瓷材料為對照組。術(shù)后2、4和8周取材，測定植入物堿性磷酸酶（ALP）活性，通過HE染色和計算機圖像分析進行組織學(xué)和組織計量學(xué)觀察，比較新生骨組織的形成。結(jié)果 術(shù)后2、4周復(fù)合植入物ALP活性測定從高到低依次為HA、HA/TCP、TCP，但在相同rhBMP-2劑量下，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），與相對應(yīng)單純支架材料比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；組織學(xué)和組織計量學(xué)檢測結(jié)果顯示各復(fù)合材料組均有新骨形成，成骨量隨時間推移而增加，2周時以HA/rhBMP-2成骨量較多，但3組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；8周時新骨形成以雙相陶瓷HA/TCP最佳，相關(guān)參數(shù)和圖像分析有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），成骨量8周較2、4周多，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；3種單純支架材料各觀察期均無骨樣組織形成。結(jié)論 雙相陶瓷材料HA/TCP是攜帶rhBMP-2的鈣磷陶瓷良好支架材料。