華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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找到 作者 包含"李校堃" 1條結(jié)果
  • 大鼠胰島分離純化技術(shù)的改良及活性研究

    目的 胰島的純度和活性對(duì)胰島移植治療糖尿病的療效有很大影響。探討一種大鼠胰島分離純化的新方法,以獲得高純度、高產(chǎn)量、活性好的胰島。 方法 選取健康成年雄性SD 大鼠10 只,體重250 ~ 300 g,逆行膽總管灌注Ⅴ型膠原酶溶液,38℃水浴消化約15 min 后,采用兩種方法純化胰島細(xì)胞:A 組采用Ficoll 400 不連續(xù)密度梯度液,B 組采用Ficoll-Paque? PLUS 溶液。行雙硫腙(dithizone,DTZ)染色鑒定胰島并計(jì)算胰島當(dāng)量(islet equivalent quantity,IEQ)、胰島純度,錐蟲(chóng)藍(lán)染色檢測(cè)胰島活性。取B 組胰島用海藻酸鈉- 聚左賴氨酸- 海藻酸鈉(alginate/poly-Llysine/ alginate,APA)包裹制備胰島微囊,體外靜止葡萄糖刺激胰島素釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)微囊化和未微囊化胰島的生物學(xué)活性。 結(jié)果 DTZ 染色示胰島呈猩紅色,有圓形、橢圓形和不規(guī)則形,胰島邊緣清晰,大部分直徑為50 ~ 300 μm。A、B組IEQ 值分別為338.04 ± 76.61 和834.80 ± 54.00,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。A、B 組胰島純度分別為88.31% ± 2.67% 和95.63% ± 1.96%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。A、B 組胰島活率分別為67.40% ± 5.15% 和86.05% ± 2.52%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。胰島APA 微囊囊形呈完整圓形,大小均勻,微囊直徑為1.5 ~ 2.0 mm,每個(gè)微囊中包裹1 ~ 3 個(gè)胰島。葡萄糖刺激釋放胰島素實(shí)驗(yàn)顯示,未微囊化胰島和微囊化胰島在低糖下的胰島素分泌濃度分別為(5.53 ±1.64) ng/ mL 和(4.76 ± 0.26)ng/mL,高糖下分別為(11.95 ± 2.07)ng/mL 和(14.34 ± 3.18)ng/mL,高糖刺激下胰島素釋放量為低糖刺激的2 倍多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05);兩組的刺激指數(shù)分別為2.16 ± 0.30 和3.01 ± 0.59,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P gt; 0.05)。 結(jié)論 Ficoll-Paque? PLUS 溶液作為純化液分離純化胰島的方法具有操作簡(jiǎn)便、胰島產(chǎn)量高、純度高等優(yōu)點(diǎn),獲得的胰島經(jīng)微囊化或未微囊化體外培養(yǎng)均有良好活性。

    發(fā)表時(shí)間:2016-08-31 05:47 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
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