【摘 要】 目的 尋找制備富血小板血漿 （platelet-rich plasma，PRP）的最佳離心方案，并制備PRP凝膠用于皮下注射促進大鼠皮瓣成活，探討其有效性及作用機制。 方法 取12周齡健康Wistar大鼠72只，體重250～300 g。于24只大鼠心臟取動脈血8～10 mL/只，分別采用3種離心方法制備PRP。A組：以200 × g離心15 min、500 × g離心10 min；B組：以312 × g離心10 min、1 248 × g離心10 min；C組：以200 × g離心15 min，200 × g離心10 min。在PRP制作過程中取各組全血、PRP及貧血小板血漿（platelet-poor plasma，PPP）行血小板計數(shù)，根據(jù)血小板計數(shù)結(jié)果選擇最佳離心方案，并取對應(yīng)的PRP、PPP及第1次離心后血清，采用ELISA法測定PDGF-BB和TGF-β1濃度；并制備PRP及PPP凝膠。于48只大鼠背部制備大小為11 cm × 3 cm的皮瓣，隨機分為3組（n=16）：PRP組每只大鼠皮瓣下注射100 mL PRP凝膠，PPP組同法注射100 mL PPP凝膠，對照組不作處理。術(shù)后大體觀察皮瓣成活情況，7 d后取材計算成活率；組織學(xué)觀察計數(shù)炎性細胞，免疫組織化學(xué)染色計數(shù)微血管；于術(shù)后8、24 h，3、7 d行實時熒光定量PCR檢測VEGF、EGF、PDGF-AA和PDGF-BB mRNA表達。 結(jié)果 血小板計數(shù)結(jié)果示，A組血小板濃縮倍數(shù)最高，為最佳制備方法。A組PRP中TGF-β1、PDGF-BB濃度明顯高于血清及PPP （P lt; 0.05）。與對照組相比，術(shù)后PRP組傷口無膿性分泌物；PRP組皮瓣成活率為61.2% ± 9.1%，與PPP組35.8% ± 11.3%及對照組28.0% ± 5.4%比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。PRP組炎性細胞計數(shù)較PPP組及對照組明顯減少， 微血管計數(shù)明顯高于其余兩組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。實時熒光定量PCR檢測示與PPP組及對照組比較，PRP組VEGF及PDGF-BB mRNA術(shù)后均高表達，而EGF mRNA僅在術(shù)后24 h內(nèi)呈高表達，PDGF-AA mRNA在3 d后開始高表達。術(shù)后3 d及7 d PRP組PDGF-AA、8 h PDGF-BB、24 h及3 d VEGF、24 h EGF的mRNA相對表達量與其他兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 以200 × g離心15 min、500 × g離心10 min是制備PRP的最佳離心方案。PRP凝膠可通過調(diào)節(jié)血管生發(fā)相關(guān)基因促進大鼠皮瓣成活。