華西醫(yī)學期刊出版社
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  • 豬滑膜源性MSCs 體外多向分化潛能的研究

    體外分離培養(yǎng)豬滑膜源性MSCs(synovium-derived MSCs,SMSCs),探討其在體外多向分化潛能。 方法 2 月齡長楓雜交豬3 頭,雌雄不限,體重8 ~ 10 kg。取豬膝關節(jié)滑膜組織分離SMSCs 并行原代及傳代培養(yǎng),待第3 代SMSCs 長滿培養(yǎng)皿后,吸去基礎培養(yǎng)液,分別加入特定培養(yǎng)液進行成軟骨、成骨、成脂誘導分化,作為實驗組;以基礎培養(yǎng)液培養(yǎng)作為對照組。成軟骨誘導21 d 后行甲苯胺藍染色、免疫組織化學染色和實時熒光定量 PCR 檢測;成骨誘導10 d 后行ALP 染色檢測,21 d 后行茜素紅染色檢測;成脂誘導21 d 后行油紅O 染色檢測。 結果 SMSCs 培養(yǎng)24 h后細胞形態(tài)細長或呈多角形;48 h 后細胞數(shù)量增多;72 h 后可見大量紡錘形細胞,其間散在分布少許小圓形細胞。實驗組成軟骨誘導21 d 后甲苯胺藍染色呈陽性,細胞外有蛋白多糖(Aggrecan)形成;免疫組織化學染色示特異軟骨基質Col Ⅱ表達;實時熒光定量PCR 檢測示Col Ⅱ A1、Aggrecan、SOX9 mRNA 表達量與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P lt; 0.05)。成骨誘導10 d 后ALP 染色陽性,21d 后茜素紅染色陽性,有鈣結節(jié)形成。成脂誘導21 d 后油紅O 染色示細胞內有脂滴形成。對照組除ALP 染色觀察呈弱陽性外,余染色均呈陰性。 結論 豬膝關節(jié)滑膜組織可分離獲取SMSCs,其在體外具有向成軟骨、成骨、成脂多向分化潛能,有望成為組織工程種子細胞來源。

    發(fā)表時間:2016-09-01 09:07 導出 下載 收藏 掃碼
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