目的 觀察川芎嗪（TMP）對人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）缺氧相關因子表達的影響。方法 體外培養(yǎng)HUVECs，取2~5代細胞進行實驗。將HUVECs分為對照組、氯化鈷（CoCl2）缺氧組及50、100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組。對照組不作任何處理。CoCl2缺氧組利用150 mu;mol/L的CoCl2干預HUVECs 4 h；50、100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組在CoCl2干預HUVECs 4 h后，再加入不同濃度TMP繼續(xù)培養(yǎng)8 h。分別提取各組細胞RNA和總蛋白，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測脯氨酰羥化酶2（PHD2）、缺氧誘導因子-1alpha;（HIF-1alpha;）、血管內皮生長因子（VEGF）mRNA和蛋白的表達。結果 實時RT-PCR檢測結果 顯示，與對照組比較，CoCl2缺氧組PHD2 mRNA表達下降（t=3.734），HIF-1alpha;和VEGF mRNA表達升高（t=4.589、3.926），差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。50、100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組分別與CoCl2缺氧組比較，PHD2 mRNA表達均升高（t=3.286、3.617、3.886），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；HIF-1alpha; mRNA表達均無明顯變化（t=1.025、0.726、-1.386），差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；VEGF mRNA表達均有所下降，但50 mu;mol/L TMP藥物處理組與之差異無統(tǒng)計學意義（t=1.696，P＞0.05），100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組與之差異有統(tǒng)計學意義（t=2.974、3.492，P＜0.05）。Western blot檢測結果 顯示，與對照組比較，CoCl2缺氧組PHD2蛋白表達下降，差異有統(tǒng)計學意義（t=3.122，P＜0.05）；HIF-1alpha;及VEGF蛋白表達均有不同程度升高，差異有統(tǒng)計學意義（t=3.778、3.257，P＜0.05）。50、100、200 mu;mol/L TMP藥物處理組分別與CoCl2缺氧組比較，PHD2 蛋白表達均升高（t=2.813、3.026、3.078），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；HIF-1alpha;、VEGF蛋白表達均有所下降，但50 mu;mol/L TMP藥物處理組與之差異無統(tǒng)計學意義（t=2.056、1.986，P＞0.05），100 mu;mol/L TMP藥物處理組（t=3.058、2.976）及200 mu;mol/L TMP藥物處理組（t=3.828、3.136）與之差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 TMP能上調缺氧HUVECs中PHD2 mRNA和蛋白的表達，下調HIF-1alpha;蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表達。
目的 觀察高糖誘導人視網膜血管內皮細胞（HRECs）脯氨酸羥化酶2(PHD2)的表達變化和對內皮細胞屏障功能的影響。方法 將培養(yǎng)至融合的HRECs分為三組，分別為正常對照組、甘露醇對照組與高糖組。正常對照組細胞培養(yǎng)液含5 mmol/L葡萄糖，甘露醇對照組細胞培養(yǎng)液含5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L甘露醇，高糖組細胞培養(yǎng)液含30 mmol/L葡萄糖。培養(yǎng)24、48 h后收集細胞蛋白、上清液及RNA。蛋白免疫印跡法檢測細胞PHD2、缺氧誘導因子-1alpha;（HIF-1alpha;）及緊密連接蛋白occludin的蛋白表達水平；酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測細胞上清液中血管內皮生長因子（VEGF）的含量；實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測細胞PHD2、HIF-1alpha;、VEGF及occludin基因的轉錄水平；相對分子質量7times;104的異硫氰酸熒光素標記的葡聚糖檢測細胞旁通透性。結果 與正常對照組相比，甘露醇對照組與高糖組HRECs中PHD2蛋白表達水平均先降低后升高，HIF-1alpha;表達升高，occludin表達降低；高糖組細胞上清液中VEGF含量增加，差異均有統(tǒng)計學意義（PHD2：F=7.618、8.627，P＜0.05；HIF-1alpha;：chi;2=7.692、7.652，P＜0.05；occludin：F=23.23、7.317，P＜0.05；VEGF：F=10.768、4.562，P＜0.05）。與正常對照組相比，甘露醇對照組與高糖組HRECs的PHD2、HIF-1alpha;、VEGF及occludin基因轉錄水平升高，差異均有統(tǒng)計學意義（PHD2：F=5.69、14.27，P＜0.05；HIF-1alpha;：F=6.07、10.47，P＜0.05；VEGF：F=12.31、9.14，P＜0.05；occludin：F=8.77、8.00，P＜0.05）。與正常對照組相比，甘露醇對照組與高糖組細胞旁通透性增加，差異有統(tǒng)計學意義（chi;2=20.57、F=56.09，P＜0.05）。結論 高糖誘導HRECs PHD2表達發(fā)生變化。PHD2可能在內皮細胞屏障破壞中發(fā)揮一定的調控作用，其機制與HIF-1alpha;、VEGF有關。