目的構(gòu)建插頭/翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子C2（homo sapiens forkhead box C2，F(xiàn)oxc2）基因慢病毒載體并轉(zhuǎn)染兔BMSCs，檢測(cè)其在BMSCs中的表達(dá)，為進(jìn)一步應(yīng)用攜帶Foxc2基因的BMSCs移植治療股骨頭缺血性壞死奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法通過RT-PCR法獲得人Foxc2基因片段，將該片段克隆至包含綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的慢病毒載體LV-GFP中，重組獲得Foxc2慢病毒質(zhì)粒，將其與pGC-LV載體、pHelper1.0載體、pHelper2.0載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，獲得Foxc2基因慢病毒載體；檢測(cè)病毒滴度。分離、培養(yǎng)兔BMSCs，以Foxc2基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染第3 代BMSCs，通過熒光表達(dá)法判定最佳感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI），并以最佳MOI進(jìn)行轉(zhuǎn)染，倒置熒光顯微鏡觀察、Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染1、3、7 d BMSCs中Foxc2的表達(dá)；對(duì)轉(zhuǎn)染后BMSCs行成骨誘導(dǎo)，茜素紅染色法觀察礦化物結(jié)節(jié)形成情況。 結(jié)果成功構(gòu)建Foxc2基因慢病毒載體，經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定完全正確，能轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞并表達(dá)GFP，病毒滴度為2 × 108 TU/mL。Foxc2基因慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs的最佳MOI為200，轉(zhuǎn)染BMSCs 3 d后經(jīng)免疫熒光檢測(cè)84.5% ± 4.8%的BMSCs可表達(dá)Foxc2。Western blot 結(jié)果顯示Foxc2在BMSCs中高表達(dá)，且在7 d內(nèi)表達(dá)水平逐漸升高。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后，茜素紅染色示細(xì)胞質(zhì)中有大量紅色的鈣化基質(zhì)沉積。 結(jié)論成功構(gòu)建并包裝獲得較高滴度的Foxc2基因慢病毒載體，慢病毒可高效并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染BMSCs，F(xiàn)oxc2表達(dá)增加，為基因治療股骨頭缺血性壞死奠定了基礎(chǔ)。
目的 通過體外實(shí)驗(yàn)探討hVEGF165 和hBMP-7 共表達(dá)重組腺相關(guān)病毒載體（recombinant adenoassociated virus，rAAV）體外生物學(xué)活性，為體內(nèi)應(yīng)用其進(jìn)行骨壞死的基因治療奠定理論基礎(chǔ)。 方法 分別采用rAAVhVEGF165-內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列（internal ribosome entry site，IRES）- hBMP-7（實(shí)驗(yàn)組）、綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標(biāo)記的rAAV-IRES-GFP（對(duì)照組）轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的第3 代兔BMSCs，于轉(zhuǎn)染后1、2、3、7 及14 d 應(yīng)用ELISA 法及轉(zhuǎn)染后14 d 應(yīng)用Western blot 法鑒定兩組hVEGF165 和hBMP-7 表達(dá)；轉(zhuǎn)染后14 d 行細(xì)胞免疫熒光染色觀察hVEGF165 和hBMP-7 表達(dá)一致性。應(yīng)用第3 代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）管狀血管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)hVEGF165 蛋白活性。取第3 代BMSCs 行誘導(dǎo)成骨實(shí)驗(yàn)，Gomori 鈣鈷法ALP 染色及茜素紅法鈣鹽染色檢測(cè)hBMP-7 蛋白活性。 結(jié)果 ELISA 檢測(cè)示隨轉(zhuǎn)染時(shí)間延長(zhǎng)，兩組hVEGF165 和hBMP-7 表達(dá)逐漸升高；實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)hVEGF165 和hBMP-7 表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組（P lt; 0.05）。Western blot 檢測(cè)示實(shí)驗(yàn)組可見hVEGF165 和hBMP-7表達(dá)，對(duì)照組未見陽(yáng)性表達(dá)。細(xì)胞免疫熒光染色觀察示實(shí)驗(yàn)組hVEGF165 和hBMP-7 染色呈陽(yáng)性，表達(dá)部位和強(qiáng)度具有較好一致性；對(duì)照組未見陽(yáng)性表達(dá)。HUVEC 管狀血管形成實(shí)驗(yàn)示實(shí)驗(yàn)組HUVEC 拉長(zhǎng)變形、出芽且相互交聯(lián)成管狀樣結(jié)構(gòu)；與對(duì)照組相比，管狀血管數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。ALP 染色見實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞出現(xiàn)深染顆粒，對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)淺著色；與對(duì)照組相比，礦化結(jié)節(jié)數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 雙基因共表達(dá)rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7體外具有良好的生物學(xué)活性。
目的 探討開放楔形脛骨高位截骨術(shù)（open wedge high tibial osteotomy，OWHTO）治療膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間室骨關(guān)節(jié)炎的效果。 方法 回顧分析 2015 年 1 月—2017 年 1 月采用 OWHTO 治療的 61 例膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間室骨關(guān)節(jié)炎患者臨床資料。男 14 例，女 47 例；年齡 44～60 歲，平均 52.8 歲。體質(zhì)量指數(shù)為 19.1～34.7 kg/m2，平均 25.3 kg/m2。左膝 27 例、右膝 34 例。病程 1～9 年，平均 5.3 年。骨關(guān)節(jié)炎分期：Ⅱ期 33 例，Ⅲ期 28 例。術(shù)前膝關(guān)節(jié)美國(guó)特種外科醫(yī)院（HSS）評(píng)分為（56.0±3.7）分，行走時(shí)膝關(guān)節(jié)疼痛視覺模擬評(píng)分（VAS）為（4.6±1.0）分。 結(jié)果 手術(shù)時(shí)間為 49～85 min，平均 66.5 min；切口長(zhǎng)度為 10～13 cm，平均 11.0 cm；總顯性失血量為 80～210 mL，平均 139.1 mL；術(shù)后臥床時(shí)間為 1～10 d，平均 4.7 d?；颊呔@隨訪，隨訪時(shí)間 12～24 個(gè)月，平均 17.3 個(gè)月。術(shù)后 3 個(gè)月 X 線片測(cè)量示脛骨平臺(tái)負(fù)重區(qū)為 60.3%～66.8%，平均 63.4%。術(shù)后 3、6 個(gè)月，膝關(guān)節(jié) HSS 評(píng)分分別為（79.1±4.2）、（85.3±3.1）分，VAS 評(píng)分分別為（1.7±0.7）、（0.6±0.5）分，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 OWHTO 治療膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間室骨關(guān)節(jié)炎療效確切，力線糾正理想，并發(fā)癥較少，但應(yīng)注意術(shù)前需要精確測(cè)量術(shù)中張開角。
目的對(duì)關(guān)節(jié)鏡下單純內(nèi)引流術(shù)與聯(lián)合囊壁切除術(shù)的近期療效進(jìn)行前瞻性對(duì)比研究。方法以 2014 年 3 月—2017 年 3 月收治的腘窩囊腫患者作為研究對(duì)象，其中 56 例符合選擇標(biāo)準(zhǔn)納入研究，隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組 28 例。試驗(yàn)組行關(guān)節(jié)鏡下腘窩囊腫內(nèi)引流術(shù)聯(lián)合囊壁切除，對(duì)照組行關(guān)節(jié)鏡下腘窩囊腫內(nèi)引流術(shù)。排除未獲得完整隨訪及術(shù)后因其他疾病接受手術(shù)者，最終試驗(yàn)組 26 例、對(duì)照組 27 例納入研究。兩組患者性別、年齡、側(cè)別、病程、腘窩囊腫最大直徑及分級(jí)、合并疾病等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。記錄兩組手術(shù)時(shí)間及術(shù)后腘窩淤斑持續(xù)時(shí)間、小腿中段后方壓痛持續(xù)時(shí)間；術(shù)后 1 d 及 1、2 周測(cè)量小腿周徑，計(jì)算觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)與術(shù)前差值；術(shù)后 1 周采用下肢血管彩色多普勒超聲觀察下肢靜脈血栓形成情況。術(shù)后 1 年行 Rauschning 和 Lindgren 分級(jí)；MRI 檢查腘窩囊腫是否消失或減小，并測(cè)量其最大直徑。結(jié)果兩組患者均獲隨訪，隨訪時(shí)間 12～14 個(gè)月，平均 12.5 個(gè)月。試驗(yàn)組手術(shù)時(shí)間、腘窩淤斑持續(xù)時(shí)間、小腿中段后方壓痛持續(xù)時(shí)間均較對(duì)照組延長(zhǎng)，術(shù)后 1 d 及 1、2 周小腿周徑差值亦大于對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。術(shù)后 1 周下肢彩超檢查發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組術(shù)后 2 例發(fā)生肌間靜脈血栓形成，對(duì)照組無(wú)下肢血栓形成，比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.236）。術(shù)后 1 年 Rauschning 和 Lindgren 分級(jí)，試驗(yàn)組 0 級(jí) 16 例、1 級(jí) 6 例、2 級(jí) 4 例，對(duì)照組為 0 級(jí) 17 例、1 級(jí) 4 例、2 級(jí) 6 例，比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=–1.872，P=0.078）。MRI 檢查示，試驗(yàn)組 9 例（34.62%）、對(duì)照組 13 例（48.15%）仍有殘余囊腫，最大直徑均未超過 2 cm；兩組其余患者囊腫均消失，隨訪期間無(wú)復(fù)發(fā)。兩組囊腫殘留率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.293，P=0.852）。結(jié)論與關(guān)節(jié)鏡下單純內(nèi)引流術(shù)相比，聯(lián)合囊壁切除術(shù)治療腘窩囊腫近期療效無(wú)明顯提升，且手術(shù)時(shí)間延長(zhǎng)，術(shù)后并發(fā)癥明顯增多。