目的探索人膽囊上皮細(xì)胞的最佳分離方法和適宜的體外生長條件，為深入研究膽囊的生理功能和相關(guān)疾病的病理機(jī)理奠定基礎(chǔ)。方法用Ⅳ型膠原酶消化及鈍性刮離法分離膽囊上皮細(xì)胞，兩步貼壁法純化。比較層粘連蛋白、多聚賴氨酸、纖維連接蛋白等不同培養(yǎng)基質(zhì)對(duì)傳代細(xì)胞生長的影響。光鏡及電鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果每個(gè)膽囊可分離得到（1～5）×107個(gè)膽囊上皮細(xì)胞，細(xì)胞活性可達(dá)90%。細(xì)胞呈典型的扁平多角狀、柱狀形態(tài)，片狀貼壁生長，上皮細(xì)胞特異性抗原CK19表達(dá)陽性。結(jié)論Ⅳ型膠原酶消化法加鈍性刮剝分離法和兩步貼壁法可成功分離高活性、高純度的人膽囊上皮細(xì)胞； 纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)器皿和含20%小牛血清及10 ng/ml hEGF的DMEM培養(yǎng)基有利于膽囊上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)。
目的 探討統(tǒng)一診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)乳腺導(dǎo)管增生性病變?cè)\斷重復(fù)性的影響,尋求提高病理診斷可重復(fù)性和準(zhǔn)確性的措施.方法 參照Page標(biāo)準(zhǔn)收集43例乳腺導(dǎo)管增生性病變,每例選取一張切片并隨機(jī)排序.10位病理醫(yī)師兩兩配對(duì)后隨機(jī)進(jìn)入試驗(yàn)組(統(tǒng)一診斷標(biāo)準(zhǔn)組)和對(duì)照組,各自獨(dú)立讀片后從輕度普通型增生、中-重度普通型增生、輕度非典型增生、中-重度非典型增生、導(dǎo)管原位癌和導(dǎo)管原位癌伴浸潤這6種診斷中選取一種,并采用STATA統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)兩組病理醫(yī)師間的診斷重復(fù)性進(jìn)行Kappa分析.同時(shí)以兩位乳腺專科病理醫(yī)師按照Page標(biāo)準(zhǔn)確認(rèn)的診斷作為參照,對(duì)兩組病理醫(yī)師診斷的準(zhǔn)確性和過度診斷進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.結(jié)果 統(tǒng)一使用Page標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)組的診斷重復(fù)性和準(zhǔn)確性均高于對(duì)照組(兩組6種、3種和2種診斷時(shí)的總K值分別為0.289 3,0.337 1,0.492 8和0.100 3,0.150 3,0.340 5),說明統(tǒng)一診斷標(biāo)準(zhǔn)有利于提高診斷重復(fù)性.同時(shí),診斷類別簡化也提高了診斷的可重復(fù)性.試驗(yàn)組醫(yī)師仍存在不同程度的過度診斷.結(jié)論 統(tǒng)一診斷標(biāo)準(zhǔn)是提高病理診斷可重復(fù)性和準(zhǔn)確性的重要措施;對(duì)診斷標(biāo)準(zhǔn)的掌握需要在實(shí)踐中進(jìn)一步提高.
本文旨在通過對(duì)去細(xì)胞化天然材料進(jìn)行肝素化修飾, 改善其作為組織工程支架材料的抗凝血性能。本文以豬肝去細(xì)胞化材料為研究對(duì)象, 對(duì)材料分別進(jìn)行了層層自組裝(LBL)肝素化修飾、多點(diǎn)連接(MPA)肝素化修飾或末端連接(EPA)肝素化修飾, 然后檢測(cè)它們的肝素化效果及抗凝血性能。結(jié)果表明, 三種肝素化修飾材料的抗凝血性能與未經(jīng)處理的去細(xì)胞化材料相比均有顯著提高, 其中EPA修飾肝素化材料的凝血酶時(shí)間(TT)、凝血酶原時(shí)間(PT)和活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)均超過檢測(cè)儀器最大值。同時(shí), EPA修飾肝素化去細(xì)胞化材料修飾時(shí)間最短, 肝素釋放最慢, 復(fù)鈣時(shí)間最長。本研究結(jié)果顯示EPA肝素化修飾的去細(xì)胞化材料獲得了良好的抗凝血性能。
規(guī)律性短重復(fù)回文序列簇（CRISPR）和 CRISPR 輔助蛋白 9（Cas9）構(gòu)成的 CRISPR/Cas9 基因編輯技術(shù)快速推進(jìn)了基因修飾豬作為醫(yī)學(xué)研究模式動(dòng)物的廣泛應(yīng)用。而高效的靶基因單鏈向?qū)?RNA（sgRNA）是利用 CRISPR/Cas9 技術(shù)進(jìn)行基因編輯成功的關(guān)鍵，對(duì)于豬等繁殖周期較長的大動(dòng)物，則需要在實(shí)施動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前，在體外篩選出高效的 sgRNA 以避免時(shí)間和資源成本浪費(fèi)。另外，如何高效獲得陽性基因編輯單克隆細(xì)胞是目前尚待解決的難題。本研究建立了靶向豬基因組的 sgRNA 快速篩選方法，利用熒光載體富集基因編輯細(xì)胞，同時(shí)探索利用圖案微陣列培養(yǎng)技術(shù)快速獲得單克隆細(xì)胞的方法，在此基礎(chǔ)上高效獲得延胡索酰乙酰乙酸酶（Fah）基因編輯細(xì)胞，為后續(xù)生產(chǎn)作為人類肝細(xì)胞生物反應(yīng)器的Fah基因敲除豬奠定基礎(chǔ)。