華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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  • 人羊水來(lái)源c-kit+ 間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特征和心肌誘導(dǎo)分化

    【摘 要】 目的 探討人羊水來(lái)源c-kit+ 間充質(zhì)干細(xì)胞(c-kit+ human amniotic fluid-derived mesenchymal stemcells,c-kit+ HAFMSCs)的生物學(xué)特征及心肌誘導(dǎo)分化能力。 方法 通過(guò)產(chǎn)前診斷或自愿引產(chǎn)獲取50 份孕中期羊水標(biāo)本,經(jīng)流式細(xì)胞儀分選c-kit+ HAFMSCs,MTT 法觀(guān)察細(xì)胞增殖情況,并通過(guò)流式細(xì)胞儀、細(xì)胞免疫化學(xué)染色觀(guān)察行細(xì)胞表型鑒定。在體外經(jīng)成骨及成脂誘導(dǎo)分化,于誘導(dǎo)培養(yǎng)后21 d 采用von Kossa 染色觀(guān)察鈣沉積顆粒,油紅O 染色觀(guān)察脂滴形成情況。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)5 氮-2’ 脫氧胞苷心肌誘導(dǎo)前后,NKx2.5、Tbx5、GATA-4、α-MHC 4 種心肌特異性基因表達(dá)情況。 結(jié)果 經(jīng)流式細(xì)胞儀分選,人孕中期羊水中c-kit+ HAFMSCs 含量約為貼壁細(xì)胞的3.07% ± 1.03%;體外增殖迅速,表達(dá)MSCs 表面標(biāo)志CD29、CD44、CD73、CD90、CD105,不表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)志CD34、CD45;表達(dá)人類(lèi)白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-ABC,不表達(dá)HLA-DR。細(xì)胞免疫化學(xué)染色示CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、Oct-4 染色呈陽(yáng)性,CD34、CD45 染色呈陰性。MTT 檢測(cè)示第5、10、15 代c-kit+ HAFMSCs 具有相似的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。成骨和成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)后21 d,細(xì)胞內(nèi)有鈣鹽沉積和脂滴形成。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)示,心肌誘導(dǎo)后14 d, NKx2.5、Tbx5、GATA-4、α-MHC 4 種心肌特異性基因表達(dá)均較誘導(dǎo)前明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P lt; 0.05)。 結(jié)論 通過(guò)流式細(xì)胞儀分選的c-kit+ HAFMSCs 在體外可以誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞,可能成為心肌再生性治療的種子細(xì)胞。

    發(fā)表時(shí)間:2016-08-31 04:22 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
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