【摘 要】 目的 體外分離培養(yǎng)人羊水間充質(zhì)干細(xì)胞（human amniotic fluid-derived mesenchymal stem cells，HAFMSCs），觀察低溫凍存復(fù)蘇后HAFMSCs 生物學(xué)特征，為進(jìn)一步研究奠定理論基礎(chǔ)。 方法 取12 份自愿捐贈(zèng)的孕16 ～ 20 周羊水標(biāo)本，采用改良兩步法分離培養(yǎng)HAFMSCs，用含量不同的FBS、DMSO 凍存液凍存細(xì)胞，液氮凍存12 周后42℃水浴復(fù)蘇，錐蟲藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞存活率，MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖速度并繪制生長曲線，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凍存復(fù)蘇后HAFMSCs 表型。對(duì)凍存復(fù)蘇后的HAFMSCs 進(jìn)行成脂、成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)，并分別采用油紅O、von Kossa 染色進(jìn)行鑒定；實(shí)時(shí)熒光定量PCR 分析細(xì)胞凍存前后Oct-4、Nanog mRNA 表達(dá)差異。 結(jié)果 細(xì)胞凍存12 周后，不同的凍存方案對(duì)細(xì)胞存活率影響有差異，優(yōu)化的凍存方案為DMEM/FBS/DMSO=50%/40%/10%。凍存復(fù)蘇后的HAFMSCs 呈漩渦狀排列，生長曲線呈S 形，與凍存前細(xì)胞生長曲線相似。流式細(xì)胞儀檢測(cè)示凍存復(fù)蘇后細(xì)胞的MSCs 表型CD29、CD44、CD73、CD90 為陽性，造血干細(xì)胞表型CD34、CD45 為陰性。成脂、成骨誘導(dǎo)21 d，油紅O、von Kossa 染色均呈陽性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)示凍存前后Oct-4、Nanog mRNA 表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 HAFMSCs 具有體外增殖快、分化能力強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)；并可耐受短期凍存，復(fù)蘇后細(xì)胞存活率高，生物學(xué)特征及分化潛能未發(fā)生明顯變化，凍存液DMEM/FBS/DMSO=50%/40%/10% 是較好凍存方案。