華西醫(yī)學(xué)期刊出版社
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找到 作者 包含"王石" 1條結(jié)果
  • Egr-1 DNA酶抑制自體移植靜脈內(nèi)膜增生的實驗研究

    目的探討早期生長反應(yīng)基因-1(Egr-1)DNA酶(Egr-1 DNA enzyme,EDRz)對血管平滑肌細胞(VSMC)增殖和內(nèi)膜增生的抑制作用,從而證實基因治療靜脈移植后狹窄、閉塞的可行性。方法構(gòu)建EDRz,建立自體靜脈移植模型,將大鼠右頸總靜脈端-端吻合于腎下腹主動脈,EDRz轉(zhuǎn)染移植靜脈,分別于移植后1、2、6、24 h及3、7、14、28、42 d切取移植靜脈標本,每個時相按隨機數(shù)字表法隨機抽取10只大鼠。熒光顯微鏡下觀察EDRz轉(zhuǎn)染移植靜脈情況; 應(yīng)用原位雜交和RT-PCR方法檢測Egr-1 mRNA的表達; 應(yīng)用Western蛋白印跡和免疫組織化學(xué)方法檢測Egr-1蛋白表達情況; HE染色光鏡下觀察組織學(xué)形態(tài)。結(jié)果①EDRz轉(zhuǎn)染移植靜脈情況: 移植后1 h時,EDRz主要位于移植靜脈的外膜、中膜和部分內(nèi)皮細胞; 2、6及24 h時,EDRz則主要位于移植靜脈的中膜; 7 d時,EDRz主要位于移植靜脈的內(nèi)膜; 14、28及42 d時未檢測到EDRz的表達。②Egr-1 mRNA表達結(jié)果。RT-PCR檢測結(jié)果: 轉(zhuǎn)染EDRz后1 h時,Egr-1 mRNA表達出現(xiàn)高峰,2、6及24 h表達下降,3 d時表達微弱,移植后7、14、28及42 d未見Egr-1 mRNA的表達,轉(zhuǎn)染EDRz后1 h時Egr-1 mRNA表達明顯高于其余各時相(Plt;0.01)。原位雜交檢測Egr-1 mRNA表達的變化趨勢與RT-PCR結(jié)果基本一致。③Egr-1蛋白表達結(jié)果。Western蛋白印跡結(jié)果: 正常靜脈中未檢測到Egr-1蛋白陽性表達。轉(zhuǎn)染EDRz后2 h時,出現(xiàn)Egr-1蛋白陽性表達,6 h、24 h及3 d時其表達逐漸降低,移植后1 h時和移植后7、14、28及42 d時未見Egr-1蛋白陽性表達。移植后2 h時的Egr-1蛋白表達的吸光度值高于其他時相(Plt;0.01)。免疫組織化學(xué)方法檢測的Egr-1蛋白陽性表達的變化趨勢與Western蛋白印跡結(jié)果基本一致。④EDRz轉(zhuǎn)染移植靜脈與未轉(zhuǎn)染同期相比VSMC的增殖程度和內(nèi)膜厚度明顯減輕。結(jié)論EDRz通過減少Egr-1在自體移植靜脈中的表達,可有效地抑制自體移植靜脈中VSMC增殖和內(nèi)膜增生,可用來防治自體靜脈移植后所導(dǎo)致的血管狹窄、閉塞。

    發(fā)表時間:2016-09-08 10:45 導(dǎo)出 下載 收藏 掃碼
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