目的 比較采用兩種不同方法接種的hBMSCs 在生物珊瑚支架中的三維空間分布和基因表達(dá)。 方法 采用傳統(tǒng)接種法（A 組）和纖維蛋白凝膠接種法（B 組）構(gòu)建hBMSCs 和生物珊瑚支架復(fù)合體。A 組孵育3 h，B 組孵育30 min 后檢測(cè)兩組細(xì)胞接種效率。培養(yǎng)后2、7、14、21 d，兩組分別取材行DAPI 染色后，熒光顯微鏡觀察，采用AxioVision 圖像分析軟件測(cè)量每個(gè)切片10 倍物鏡視野中的細(xì)胞數(shù)量，以切片的不同水平區(qū)域（從表面到底部為L(zhǎng)1 ～ L5）和垂直區(qū)域（從中心到邊緣）比較兩組細(xì)胞分布情況；采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 檢測(cè)成骨分化基因骨凝集素（osteonectin，ON）、核心結(jié)合因子α1（core binding factor α1，Cbfα1）和骨鈣素（osteocalcin，OC）表達(dá)。 結(jié)果 B 組細(xì)胞接種效率為88.32% ± 4.20%，明顯高于A組66.51% ± 12.33%（P lt; 0.01）。培養(yǎng)后2 d，兩組細(xì)胞水平區(qū)域分布由L1 ～ L4 逐漸減少（P lt; 0.05）；垂直區(qū)域細(xì)胞數(shù)目比較，A 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05），B 組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；兩組間各成骨分化基因表達(dá)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。培養(yǎng)后 7 d，A 組細(xì)胞數(shù)目較2 d 時(shí)逐步減少，各水平區(qū)域間細(xì)胞數(shù)目比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05），而B 組細(xì)胞數(shù)目和各成骨分化基因表達(dá)量迅速增加，各水平區(qū)域細(xì)胞數(shù)目趨于平衡，細(xì)胞分布均勻（P gt; 0.05），ON 和Cbfα1 基因表達(dá)量明顯高于A 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt; 0.05）。培養(yǎng)后14 d，A 組各水平及垂直區(qū)域內(nèi)的細(xì)胞數(shù)目均較7 d 時(shí)急速減少（P lt; 0.05），B 組細(xì)胞增殖良好且細(xì)胞總數(shù)與7 d 時(shí)相近；B 組OC 基因表達(dá)量達(dá)峰值，兩組間各基因表達(dá)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt; 0.05）。培養(yǎng)后21 d，兩組各水平區(qū)域細(xì)胞數(shù)目和兩組間各基因表達(dá)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；兩組各垂直區(qū)域細(xì)胞數(shù)目比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt; 0.05）。培養(yǎng)后714、21 d，B 組大部分區(qū)域細(xì)胞數(shù)目均較A 組多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 通過纖維蛋白凝膠接種較傳統(tǒng)方法接種可使hBMSCs 在支架中空間分布更均勻，能達(dá)到更快的細(xì)胞增殖和更有效的成骨分化。