目的構(gòu)建抑制大鼠心肌細(xì)胞kir2．1基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP6-kir2．1，觀察對(duì)大鼠心肌細(xì)胞kir2．1信使RNA（mRNA）、蛋白表達(dá)情況及搏動(dòng)頻率的影響。方法選擇5個(gè)針對(duì)大鼠心肌細(xì)胞kir2．1基因的RNA干擾（RNA interference）位點(diǎn)，設(shè)計(jì)合成5對(duì)相應(yīng)的寡核苷酸鏈，形成雙鏈后依次將其連人帶有U6啟動(dòng)子的載體，得到含5個(gè)目的基因的重組質(zhì)粒pEGFP6-kir2．1。轉(zhuǎn)染大鼠心肌細(xì)胞，并將其分為3組：實(shí)驗(yàn)組、陰性質(zhì)粒對(duì)照組和空白對(duì)照組。轉(zhuǎn)染后72h，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT—PCR）和蛋白印跡法（Western—blotting）檢測(cè)kir2．1mRNA和蛋白表達(dá)情況，并觀察細(xì)胞搏動(dòng)頻率。結(jié)果轉(zhuǎn)染后72h，實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞kir2．1mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于兩對(duì)照組（P〈0．01），兩對(duì)照組間比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)驗(yàn)組搏動(dòng)頻率增加，并顯著高于兩對(duì)照組（P〈0．01），兩對(duì)照組之間搏動(dòng)頻率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP6-kir2．1能明顯抑制大鼠kir2．1基因的表達(dá)，提高大鼠心肌細(xì)胞的自律性。
目的 綜述細(xì)胞移植構(gòu)建心臟生物起搏器的研究現(xiàn)狀與存在的問(wèn)題，并展望其前景。 方法 廣泛查閱近十年來(lái)有關(guān)細(xì)胞移植構(gòu)建心臟生物起搏器的文獻(xiàn)，并進(jìn)行綜述。 結(jié)果 在體實(shí)驗(yàn)已證實(shí)細(xì)胞移植構(gòu)建心臟生物起搏技術(shù)方法的可行性，目前多通過(guò)竇房結(jié)細(xì)胞移植和干細(xì)胞移植構(gòu)建心臟生物起搏器，但存在移植的心肌細(xì)胞擴(kuò)增困難，以及心臟生物起搏器構(gòu)建成功率低、功能不夠穩(wěn)定等缺點(diǎn)。應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)可能是解決這些問(wèn)題的途徑之一。 結(jié) 論 細(xì)胞移植構(gòu)建心臟生物起搏器是可行的，有廣闊潛在的臨床應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步研究。
生物起搏器是治療嚴(yán)重緩慢性心律失常的一個(gè)新策略, 而尋找合適的起搏細(xì)胞是其首要問(wèn)題。本文綜述了通過(guò)轉(zhuǎn)染基因、化學(xué)誘導(dǎo)、共培養(yǎng)以及特定培養(yǎng)基培養(yǎng)的方法將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)為起搏樣細(xì)胞的研究進(jìn)展, 分析了它們作為生物心臟起搏器種子細(xì)胞尚需解決的問(wèn)題。