目的 研究地塞米松、重組人成纖維細(xì)胞生長因子（recombinant human fibroblast growth factor, rhFGF）及重組人骨形成蛋白2（recombinant humanbone morphogenetic protein 2, rhBMP-2）對兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（marrow stromal stemcells，MSCs）生長及分化的量效作用，為其在骨組織工程中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法 體外分離培養(yǎng)兔MSCs，分為1個空白對照組及9個實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組分別與終濃度為10-8、10-7、10-6 mol/L地塞米松；終濃度為50、200、500 ng/ml rhFGF；終濃度為50、50、1 000 ng/ml rhBMP-2培養(yǎng)。于4、7 d終止培養(yǎng)并測定細(xì)胞總蛋白及堿性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性。結(jié)果 與空白對照組比較，10-6mol/L地塞米松顯著抑制細(xì)胞蛋白合成(P＜0.05)，而10-8、10-7 mol/L地塞米松對細(xì)胞蛋白合成無明顯影響；10-6、10-7 mol/L地塞米松刺激MSCs高度表達(dá)ALP(P＜0.05)。rhFGF各濃度組顯著促進(jìn)細(xì)胞蛋白合成量差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，表現(xiàn)ALP活性抑制。rhBMP-2各濃度組對細(xì)胞蛋白合成無明顯影響；50 ng/ml rhBMP-2不影響MSCs的ALP活性；當(dāng)濃度增至500 ng/ml與1000 ng/ml時， ALP活性顯著增加（Plt;0.05）。結(jié)論 10-7mol/L地塞米松及500、1000 ng/ml rhBMP-2在不影響MSCs增殖的前提下，適當(dāng)濃度能顯著促進(jìn)MSCs向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化，在骨組織工程的研究中有重要的應(yīng)用價值。
目的 為解決組織工程中種子細(xì)胞數(shù)量不足及為組織工程種子細(xì)胞研究提供標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞，建立永生化hBMSCs（MSCxj）系，進(jìn)一步探討MSCxj 的異位成骨能力。 方法 取凍存復(fù)蘇后生長良好的第35 代和第128 代MSCxj，擴(kuò)增培養(yǎng)至2 109 個，分別與牛松質(zhì)骨復(fù)合培養(yǎng)，作為A、B 組（n=12），C 組為單純牛松質(zhì)骨（n=12）。成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)48 h 和18 d 時行掃描電鏡觀察細(xì)胞在材料上的生長情況。于18 只4 ～ 6 周齡裸鼠背部兩側(cè)皮下各作一3 mm小切口，將3 組共36 個標(biāo)本采用組內(nèi)隨機(jī)、組間兩兩配對分別植入切口內(nèi)。處死動物前分別行四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記。于術(shù)后4、8、12周各組分別取4 個標(biāo)本行HE、麗春紅三色、四環(huán)素?zé)晒馊旧?、鼠抗人骨鈣素單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色觀察，并行形態(tài)學(xué)定量分析。 結(jié)果 細(xì)胞- 異種骨復(fù)合培養(yǎng)48 h，掃描電鏡觀察見A、B 組細(xì)胞貼附生長良好；18 d 可見大量合成的絲狀細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)小顆粒樣分泌物，并覆蓋細(xì)胞。裸鼠皮下埋植實(shí)驗(yàn)：HE、麗春紅三色、四環(huán)素?zé)晒馊旧^察示，術(shù)后4 周A、B 組標(biāo)本成骨不明顯，8 周A、B 組標(biāo)本周邊及異種骨內(nèi)部孔隙有類骨基質(zhì)沉積，12 周A、B 組標(biāo)本成骨增加，A、B 組間成骨情況比較無明顯差異；C 組各時間點(diǎn)均未見骨質(zhì)形成。鼠抗人骨鈣素單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色顯示，A、B 組8 周及12 周骨陷窩內(nèi)骨鈣素染色呈陽性。形態(tài)學(xué)定量分析顯示，術(shù)后8 周A、B組骨長入率分別為5.64% ± 2.68%和4.92% ± 2.95%，術(shù)后12 周分別為13.94% ± 2.21% 和14.34% ± 3.46%，兩組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；組內(nèi)術(shù)后12周骨長入率均高于術(shù)后8 周，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 MSCxj 與原代培養(yǎng)hBMSCs 一樣具有良好的異位成骨能力，可作為骨組織工程的種子細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)及臨床研究。