【摘 要】 目的 探討脫細胞軟骨基質(zhì)三維多孔支架的制備方法以及將其應用于關(guān)節(jié)軟骨組織工程的可行性。 方法 取天然人軟骨粉碎后，采用梯度離心法取100 nm ～ 5 μm 軟骨微絲，脫細胞處理后制備為質(zhì)量體積比為3%的懸液，采用冷凍凍干法制備脫細胞軟骨基質(zhì)三維多孔支架。254 nm 紫外線和碳化二亞胺/ N- 羥基琥珀酰亞胺對支架進行交聯(lián)。冷凍凍干后，對支架材料進行組織學及掃描電鏡觀察，測定支架孔徑和孔隙率、吸水率，并采用MTT 法分析支架浸提液毒性。分離培養(yǎng)犬BMSCs，用TGF-β1 成軟骨誘導后種植至支架，倒置顯微鏡、電鏡觀察細胞在支架上的生長、分化情況。 結(jié)果 組織學觀察顯示，三維多孔支架中無軟骨細胞碎片殘留，甲苯胺藍染色、番紅O 染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學染色均呈陽性。掃描電鏡顯示支架內(nèi)孔洞相互連通，孔徑為（155 ± 34）μm，孔隙率為91.3% ± 2.0%，吸水率為451% ± 155%。MTT 法顯示不同濃度支架浸提液與對照DMEM 培養(yǎng)液吸光度值比較，差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），支架無細胞毒性。倒置顯微鏡觀察，細胞在支架上黏附良好；掃描電鏡下細胞在支架上均勻分布，細胞呈圓形或橢圓形，并有基質(zhì)分泌。 結(jié)論 制備的脫細胞軟骨基質(zhì)三維多孔支架去細胞徹底，保留了軟骨ECM 主要成分，無毒，具備合適的孔徑和孔隙率，生物相容性良好，是軟骨組織工程良好的支架載體。