目的 二膦酸鹽類藥物可抑制骨重塑，通過觀察阿侖膦酸鈉（alendronate，ALN）對IL-1β 體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的影響，探討ALN 治療骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）的可行性。 方法 取15 只1 月齡SPF 級SD 大鼠（雌雄不限，體重100 ～ 150 g）膝關(guān)節(jié)軟骨，體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞并傳至第3 代。倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行鑒定。將第3 代軟骨細(xì)胞分為3 組：空白對照組（A 組）軟骨細(xì)胞用常規(guī)DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)5 d；IL-1β 誘導(dǎo)組（B 組）軟骨細(xì)胞以10 ng/mL 重組人IL-1β 培養(yǎng)2 d 后更換為常規(guī)DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)3 d；IL-1β 誘導(dǎo)后加ALN 培養(yǎng)組（C 組）軟骨細(xì)胞以10 ng/mL 重組人IL-1β 培養(yǎng)2 d 后更換為濃度為1 × 10-6mol/L 的ALN 培養(yǎng)3 d。培養(yǎng)后取各組細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色及實(shí)時PCR 檢測，觀察細(xì)胞中Ⅱ型膠原（collagen type Ⅱ，Col Ⅱ）、基質(zhì)金屬蛋白酶13（matrix metalloproteinase 13，MMP-13）和β- 連環(huán)蛋白（β-catenin）的表達(dá)水平。 結(jié)果 甲苯胺藍(lán)染色示培養(yǎng)的細(xì)胞呈異染性，證實(shí)為軟骨細(xì)胞。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示：A、B、C 組Col Ⅱ表達(dá)積分吸光度（IA）值分別為15.377 0 ± 0.571 8、5.463 2 ± 0.450 4、10.290 7 ± 0.499 2，C 組高于B 組，但低于A 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；MMP-13 表達(dá)IA 值分別為2.777 5 ± 0.199 6、6.998 1 ± 0.329 7、3.068 6 ± 0.205 6，C 組明顯低于B 組（P lt; 0.05），但與A 組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；β-catenin 表達(dá)IA 值分別為4.390 3 ± 0.551 9、11.799 9 ± 0.348 7、6.611 7 ± 0.381 8，C 組低于B 組，但高于A 組， 差 異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。實(shí)時PCR 檢測示，C 組Col Ⅱ mRNA 表達(dá)高于B 組，MMP-13 及β-catenin 的mRNA 表達(dá)低于B 組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；Col Ⅱ和β-catenin mRNA 表達(dá)高于A 組，MMP-13 mRNA表達(dá)低于A 組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 ALN 可能通過抑制IL-1β 誘導(dǎo)的大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Col Ⅱ的降解并下調(diào)MMP-13 及 β-catenin 因子的表達(dá)，對軟骨細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。
研究仙靈骨葆對卵巢切除大鼠股骨骨折愈合的作用。 方法 健康12 周齡雌性SD 大鼠40 只，體重（258 ± 14）g，隨機(jī)分為4 組，每組10 只。A 組僅作切口暴露腹腔；B 組僅切除卵巢；C、D 組切除卵巢同時制備右側(cè)股骨中段橫型骨折，髓內(nèi)針固定，術(shù)后分別采用生理鹽水及250 mg/（kg·d）仙靈骨葆灌胃。于術(shù)后即刻、1、2、3、4 及5 周測量A、B 組大鼠體重。術(shù)后5 周取各組右側(cè)股骨標(biāo)本，雙能 X 線骨密度儀測量股骨全長骨密度（total femur bone mineral density，tBMD）、遠(yuǎn)1/3 段骨密度（distal femur bone mineral density，dBMD）和中1/3 段骨密度（middle femur bone mineral density，mBMD），并行C、D 組CR 攝片、HE 染色和免疫組織化學(xué)染色。 結(jié)果 B 組大鼠體重從第3 周開始顯著高于A組（P lt; 0.05），絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型制備成功。CR攝片示D組骨痂量相對較多，骨折線模糊；C組骨痂量較少，骨折線清晰。B 組tBMD 和dBMD 明顯低于A 組，D 組mBMD 明顯高于C 組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；D 組tBMD 和dBMD較C 組有增高趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。組織學(xué)觀察D 組與C 組比較，骨折端大部分骨性愈合，骨髓腔可見較多毛細(xì)血管植入。免疫組織化學(xué)染色示C、D組BMP-2 的積分吸光度（IA）值分別為2.236 6 ± 0.181 8 和3.727 3 ± 0.874 2，VEGF 的IA 值分別為2.835 5 ± 0.537 0 和3.839 6 ± 0.223 0，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 仙靈骨葆可促進(jìn)卵巢切除大鼠股骨骨折愈合，加快編織骨向板層骨的轉(zhuǎn)化，這可能與上調(diào)BMP-2 和VEGF 表達(dá)相關(guān)。
目的 探討阿侖膦酸鈉（alendronate，ALN）對受IL-1β 干預(yù)后軟骨細(xì)胞的影響，以及對前交叉韌帶切斷術(shù)（anterior cruciate ligament transection，ACLT）后兔骨性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨的保護(hù)作用。 方法 取3 月齡雄性日本大耳白兔關(guān)節(jié)軟骨采用酶消化法分離軟骨細(xì)胞，并進(jìn)行體外培養(yǎng)。取第3 代軟骨細(xì)胞隨機(jī)分為3 組：ALN組（A1 組）及IL-1β 組（B1 組），采用含10 ng/mL 人重組IL-1β 的DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)2 d 后，分別更換含或不含1 ×10-6 mol/L ALN 的DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)3 d；空白組（C1 組）細(xì)胞以DMEM 完全培養(yǎng)液培養(yǎng)5 d。取各組細(xì)胞行Col Ⅱ及MMP-13 免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察及實(shí)時RT-PCR 檢測。另取24 只3 月齡雄性日本大耳白兔，隨機(jī)分為3 組（n=8）。ACLT + ALN 組（A2 組）及ACLT 組（B2 組）制備ACLT 模型，假手術(shù)組（C2 組）以同法顯露前交叉韌帶后縫合切口。術(shù)后4 d A2 組以10 μg/（kg·d）皮下注射濃度為25 μg/mL 的ALN，B2 組和C2 組予等量生理鹽水。8 周后處死動物行膝關(guān)節(jié)大體觀察，取股骨內(nèi)側(cè)髁行組織學(xué)觀察及Col Ⅱ及MMP-13 免疫組織化學(xué)染色觀察，對脛骨進(jìn)行軟骨下骨組織形態(tài)學(xué)分析。 結(jié)果 C1 組軟骨細(xì)胞胞漿中見Col Ⅱ免疫細(xì)胞化學(xué)染色表達(dá)呈強(qiáng)陽性，A1 組呈陽性表達(dá)，B1 組少見陽性顯色。A1 組積分吸光度（IA）值高于B1 組（P lt; 0.05），與C1 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)（P gt; 0.05）。C1 組軟骨細(xì)胞胞漿中未見MMP-13免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽性表達(dá)，A1 組呈陽性表達(dá)，B1 組呈強(qiáng)陽性表達(dá)。A1 組IA 值低于B1 組（P lt; 0.05），但高于C1 組（P lt; 0.05）。實(shí)時RT-PCR 檢測示A1 組Col Ⅱ mRNA 表達(dá)高于B1 組（P lt; 0.05），與C1 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）；MMP-13 mRNA 表達(dá)低于B1 組（P lt; 0.05），但高于C1 組（P lt; 0.05）。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)8 周后C2 組膝關(guān)節(jié)面無潰瘍，A2 組膝關(guān)節(jié)面有少量潰瘍，B2 組關(guān)節(jié)面潰瘍較多并有全層潰瘍。A2 組Mankin 評分低于B2 組（P lt; 0.05），但高于C2 組（P lt; 0.05）。免疫組織化學(xué)染色見C2 組關(guān)節(jié)軟骨中Col Ⅱ蛋白表達(dá)呈強(qiáng)陽性，A2 組呈陽性表達(dá)，B2 組少見陽性顯色；A2 組IA 值高于B2 組（P lt; 0.05），與C2 組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。C2 組關(guān)節(jié)軟骨中未見MMP-13 陽性表達(dá)，A2 組呈弱陽性表達(dá)，B2 組呈強(qiáng)陽性表達(dá)；A2 組IA 值低于B2 組（P lt; 0.05），但高于C2 組（P lt; 0.05）。骨形態(tài)計(jì)量學(xué)結(jié)果示：B2 組軟骨下骨骨小梁體積比、骨小梁厚度低于A2、C2 組（P lt; 0.05），骨小梁分離度、熒光百分率和骨形成率高于A2、C2 組（P lt; 0.05）。以上指數(shù)A2 組與C2 組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。各組間骨小梁數(shù)目、礦化沉積率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 ALN 能抑制ACLT 兔關(guān)節(jié)軟骨降解，保護(hù)軟骨下骨骨量和微觀結(jié)構(gòu)。在體內(nèi)、體外ALN 均能抑制MMP-13 在軟骨細(xì)胞中的表達(dá)，具有一定的軟骨細(xì)胞保護(hù)功能。