目的 探討缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）及細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase1/2，ERK1/2）在體外培養(yǎng)的胎鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元缺氧缺血再灌注后變化的趨勢及其相互關(guān)系。 方法 取15 只16 ～ 18 d 孕齡SD 大鼠的大腦皮層，進(jìn)行皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)，取培養(yǎng)5 d 的原代神經(jīng)元建立氧糖剝離（oxygen and glucose deprivation，OGD）模型。實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組1：OGD 模型制備后，更換培養(yǎng)液為含葡萄糖的神經(jīng)元完全培養(yǎng)基，以形成再灌注；取再灌注0、2、4、8、12、24 h 觀察；對(duì)照組1：正常培養(yǎng)液孵育的神經(jīng)元；實(shí)驗(yàn)組2：U0126預(yù)處理神經(jīng)元后制備OGD 模型，于再灌注后4、8 h 觀察；對(duì)照組2：DMSO 預(yù)處理神經(jīng)元后制備OGD 模型，余同實(shí)驗(yàn)組2。應(yīng)用Western blot 定量測定各組HIF-1α、VEGF 蛋白及ERK1/2、p-ERK1/2 的表達(dá)變化，SABC 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測p-ERK1/2、HIF-1α 蛋白表達(dá)及分布情況。 結(jié)果 培養(yǎng)5 d 的皮質(zhì)神經(jīng)元突起間互相連接成網(wǎng)狀。實(shí)驗(yàn)組1 HIF-1α、VEGF 蛋白表達(dá)逐漸升高，8 h 表達(dá)量最高，12 h 后逐漸下降，與對(duì)照組1 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組1 與對(duì)照組1 ERK1/2 蛋白表達(dá)無明顯差異（P gt; 0.05）。實(shí)驗(yàn)組1 p-ERK1/2 蛋白表達(dá)在2 h 時(shí)開始增加，4 h 達(dá)高峰，8 h 開始下降，與對(duì)照組1 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；實(shí)驗(yàn)組2 p-ERK1/2 蛋白表達(dá)下降，HIF-1α 及VEGF 蛋白表達(dá)也隨之下調(diào)，與對(duì)照組2 比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組2 和對(duì)照組2 ERK1/2 蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示神經(jīng)元黃棕色著色減弱，p-ERK1/2、HIF-1α 表達(dá)下降。 結(jié)論 HIF-1α及其靶基因VEGF 蛋白在OGD 再灌注后的皮質(zhì)神經(jīng)元表達(dá)具有一定時(shí)間規(guī)律性，抑制ERK1/2 信號(hào)通路后這兩個(gè)蛋白表達(dá)均下降，提示該通路在神經(jīng)元OGD 后誘導(dǎo)HIF-1α 及VEGF 的調(diào)控中起重要作用。
目的 探討 2, 3, 7, 8-四氯二苯二英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD）致胎鼠腭裂模型中 miR-381-3p 下調(diào)與胎鼠腭間充質(zhì)（mouse embryonic palatal mesenchymal，MEPM）細(xì)胞成骨分化抑制的相關(guān)性。方法 32 只 6～8 周齡 SPF 級(jí)建康 C57BL/6J 孕鼠隨機(jī)分為 TCDD 組與對(duì)照組，每組 16 只。于胚胎日第 10.5 天（embryonic day 10.5，E10.5）時(shí)，TCDD 組一次性灌胃 TCDD（28 μg/kg）、對(duì)照組給予等量玉米油。于 E13.5 和 E14.5 取出兩組胎鼠大體觀察腭突組織后，取 E13.5 和 E14.5 腭突組織行實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測 miR-381-3p 表達(dá)；E14.5 腭突組織 Western blot 檢測成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子 RUNX2 和骨橋蛋白（osteopontin，OPN）的表達(dá)。取對(duì)照組 E14.5 胎鼠腭突分離培養(yǎng) MEPM 細(xì)胞，取第 3 代細(xì)胞以含 10 nmol/L TCDD 的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，于 0、0.5、1、2、3 d 檢測 miR-381-3p 表達(dá)，0、1、2、3 d 檢測 RUNX2 和 OPN 蛋白表達(dá)。另取第 3 代 MEPM 細(xì)胞隨機(jī)分為 4 組，沉默表達(dá)組及對(duì)照組分別轉(zhuǎn)染 miR-381-3p 抑制物及抑制物對(duì)照，過表達(dá)組及對(duì)照組分別轉(zhuǎn)染 miR-381-3p 模擬物及模擬物對(duì)照。轉(zhuǎn)染 48 h 后，檢測各組 miR-381-3p 及 RUNX2 和 OPN 蛋白表達(dá)。結(jié)果 E13.5 和 E14.5 時(shí)對(duì)照組獲得活胎鼠 96 只、TCDD 組 92 只；其中，E14.5 對(duì)照組活胎鼠可見雙側(cè)腭突接觸，TCDD 組雙側(cè)腭突中間有間隙。TCDD 組胎鼠腭突組織 miR-381-3p 以及 RUNX2、OPN 蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。TCDD 處理 MEPM 細(xì)胞 0.5 和 1 d 后 miR-381-3p 相對(duì)表達(dá)量較 0 d 時(shí)明顯下降（P<0.05），2、3 d 時(shí)表達(dá)量明顯上升，與 0 d 時(shí)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；1、2、3 d 時(shí) RUNX2 及 OPN 蛋白相對(duì)表達(dá)量均較 0 d 時(shí)顯著降低（P<0.05）。MEPM 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48 h 后，沉默表達(dá)組 miR-381-3p 及 RUNX2、OPN 蛋白相對(duì)表達(dá)量均較其對(duì)照組下降，過表達(dá)組均較其對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 在 TCDD 致胎鼠腭裂模型中，miR-381-3p 表達(dá)下調(diào)可能抑制胎鼠 MEPM 細(xì)胞成骨分化。