【摘 要】 目的 構建NEP1-40（Nogo extra cellular peptide residues 1-40）基因慢病毒表達載體，為后續(xù)轉染目的細胞奠定基礎，并實現(xiàn)在細胞中高效、穩(wěn)定表達。 方法 從含有 NEP1-40 基因的 cDNA 文庫中，利用PCR 方法釣取NEP1-40 基因編碼區(qū)片段。將目的基因與酶切線性化的載體pGC-FU 進行定向連接，其產物轉化細菌感受態(tài)細胞。對長出的克隆先進行菌落PCR 鑒定，再對PCR 鑒定陽性的克隆進行測序和比對分析，比對正確的克隆即為構建成功的目的質粒。將構建成功的目的質粒和兩種輔助包裝質粒共轉染293T 細胞，包裝成慢病毒，熒光顯微鏡下觀察慢病毒轉染293T細胞后熒光表達情況，采用Western blot 檢測NEP1-40 及綠色熒光蛋白融合蛋白表達情況。 結果 PCR 產物經電泳分析表明成功獲取NEP1-40 基因cDNA 克隆，測序提示慢病毒轉染質粒連接構建正確；熒光表達檢測顯示293T 細胞中產生慢病毒顆粒；Western blot 顯示NEP1-40 在細胞內穩(wěn)定表達。 結論 成功構建NEP1-40 基因慢病毒表達載體，為后續(xù)轉染目的細胞后從分子水平探討NEP1-40 基因功能奠定了實驗基礎。