目的 用反轉(zhuǎn)錄PCR法，調(diào)取膽囊癌細(xì)胞內(nèi)的端粒酶RNA(hTR)基因，并針對(duì)其序列設(shè)計(jì)錘頭狀核酶切割基因序列，并將其構(gòu)建入真核表達(dá)載體pTriEx4內(nèi)。方法 根據(jù)hTR cDNA序列，設(shè)計(jì)引物，經(jīng)RT-PCR法從體外培養(yǎng)的膽囊癌細(xì)胞內(nèi)調(diào)取hTR模板區(qū)基因，根據(jù)其測(cè)序結(jié)果，合成錘頭狀核酶基因，與經(jīng)相應(yīng)酶切的真核表達(dá)載體連接，酶切鑒定重組體的正確性。結(jié)果經(jīng)RT-PCR從細(xì)胞內(nèi)調(diào)出68 bp序列，與hTR cDNA比較，與模板區(qū)域堿基序列一致。核酶基因重組子經(jīng)酶切鑒定序列正確。結(jié)論 RT-PCR法可調(diào)出膽囊癌hTR基因有效片段； 成功構(gòu)建了針對(duì)hTR模板區(qū)的核酶基因的真核表達(dá)載體，為膽囊癌的基因治療奠定了基礎(chǔ)。