目的 對(duì)乳豬竇房結(jié)所在部位進(jìn)行準(zhǔn)確定位，建立一套可靠的竇房結(jié)細(xì)胞取材、分離、純化培養(yǎng)技術(shù)；觀察竇房結(jié)細(xì)胞與Col Ⅰ纖維支架的相容性。 方 法 24 h 內(nèi)新生純種長(zhǎng)白山乳豬5 只，雌雄不拘，體重0.45 ～ 0.55 kg。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用多導(dǎo)電生理記錄儀標(biāo)記房波最早出現(xiàn)的部位，在該位置取材行原代竇房結(jié)細(xì)胞培養(yǎng)，分別采用常規(guī)方法培養(yǎng)和差速貼壁分離技術(shù)、5-BrdU 處理純化培養(yǎng)；于左心房部位取材行心房肌細(xì)胞純化培養(yǎng)作為對(duì)照。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞貼壁時(shí)間、單細(xì)胞出現(xiàn)搏動(dòng)時(shí)間、搏動(dòng)頻率等。將純化培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞以5 × 105 個(gè)/mL 密度接種至經(jīng)預(yù)濕處理的Col Ⅰ纖維支架復(fù)合培養(yǎng)5 d，行HE 染色觀察及掃描電鏡觀察。 結(jié)果 房波最早出現(xiàn)的位置即為竇房結(jié)所在部位。純化培養(yǎng)的竇房結(jié)細(xì)胞有3 種形態(tài)，即梭形、三角形與不規(guī)則形，其中梭形細(xì)胞最多；心房肌細(xì)胞主要為三角形及不規(guī)則形，而無(wú)梭形細(xì)胞。竇房結(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)與常規(guī)培養(yǎng)比較，梭形細(xì)胞所占比例分別為73.0% ± 2.9%、44.7% ± 2.3%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；不規(guī)則形細(xì)胞分別為7.0% ± 1.7%、36.1% ± 2.6%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）；三角形細(xì)胞分別為20.0% ± 2.1%、19.2% ± 2.5%，二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt; 0.05）。竇房結(jié)細(xì)胞復(fù)合Col Ⅰ纖維支架培養(yǎng)5 d，HE 染色觀察示Col Ⅰ纖維支架材料中有大量細(xì)胞；掃描電鏡見(jiàn)細(xì)胞成團(tuán)吸附于支架表面及孔隙側(cè)壁，并可見(jiàn)細(xì)胞間通過(guò)突起相互連接，或伸出偽足貼附于支架孔隙壁上。 結(jié)論 通過(guò)準(zhǔn)確竇房結(jié)定位，采用差速貼壁結(jié)合5-BrdU 處理的純化培養(yǎng)可明顯提高乳豬竇房結(jié)梭形細(xì)胞比例，是一種可靠的竇房結(jié)細(xì)胞純化培養(yǎng)技術(shù)。竇房結(jié)細(xì)胞和Col Ⅰ纖維支架有較好的細(xì)胞相容性。
目的 研究成肌細(xì)胞移植治療假肥大型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（duchenne muscular dystrophy，DMD）的效果，探討基因治療DMD 的方法及可行性。 方法 用多步酶消化法與差速貼壁法培養(yǎng)C57/BL10 小鼠成肌細(xì)胞，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。取第4 代細(xì)胞用5-BrdU 標(biāo)記。將24 只DMD 模型鼠——mdx 小鼠（4 ～ 6 周齡，雄性，體重13.8 ～ 24.6 g）隨機(jī)分為兩組（n=12），A 組經(jīng)尾靜脈分2 次（間隔2 周）注射1 × 106 個(gè)/mL 標(biāo)記后成肌細(xì)胞，B 組同法注射1 mL DMEM/F12 培養(yǎng)基為對(duì)照。術(shù)后4 周采用一次性游泳力竭實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠運(yùn)動(dòng)能力，處死后取材行HE 染色及5-BrdU、結(jié)蛋白、抗肌萎縮蛋白（dystrophin，Dys）免疫組織化學(xué)染色觀察，并行圖像分析。 結(jié)果 原代成肌細(xì)胞培養(yǎng)5 ～ 7 d 后即可傳代，可獲得穩(wěn)定傳代及足量的細(xì)胞。A 組小鼠一次性游泳力竭時(shí)間為（60.72 ± 5.76）min，B 組為（47.77 ± 5.40） min，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.01）。術(shù)后4 周HE 染色示A 組可見(jiàn)變成圓形且透明染色的肌細(xì)胞，肌纖維細(xì)胞核中心移位（centrally nucleated fibers，CNF）比例為67%；B 組肌纖維粗細(xì)不等，可見(jiàn)肥大、萎縮、變性和肌纖維壞死等改變，CNF 比例gt; 80%。免疫組織化學(xué)染色示，A 組5-BrdU、結(jié)蛋白、Dys 表達(dá)均呈陽(yáng)性，B 組少見(jiàn)表達(dá)或呈陰性表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示，A、B 組結(jié)蛋白積分吸光度（IA）值分別為489.70 ± 451.83 和71.15 ± 61.14，陽(yáng)性面積占視野總面積的比值分 別為0.314 3 ± 0.197 3 和0.102 8 ± 0.062 8（P lt; 0.05） ；Dys IA 值分別為5 424.64 ± 2 658.01 和902.12 ± 593.51（P gt; 0.05）， 陽(yáng) 性面積占視野總面積的比值分別為0.323 7 ± 0.117 7 和0.035 2 ± 0.032 9（P lt; 0.05）。 結(jié)論 成肌細(xì)胞移植治療小鼠DMD 有一定的治療作用。