目的 觀察氣道平滑肌細(xì)胞經(jīng)哮喘致敏血清刺激后嗜酸粒細(xì)胞趨化因子( Eotaxin) 的表達(dá)變化, 并探討其可能的機(jī)制。方法 貼壁法體外培養(yǎng)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞。建立大鼠哮喘模型,采血收集致敏血清。用致敏血清刺激體外培養(yǎng)的氣道平滑肌細(xì)胞, 或同時(shí)予以致敏血清和地塞米松干預(yù)。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定培養(yǎng)液上清中Eotaxin 水平, 放射免疫法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷( cAMP) 表達(dá), 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)半定量檢測(cè)細(xì)胞中Eotaxin mRNA 表達(dá)。結(jié)果 致敏血清干預(yù)后,細(xì)胞培養(yǎng)上清Eotaxin 水平和細(xì)胞內(nèi)Eotaxin mRNA 表達(dá)均較正常對(duì)照組顯著升高[ ( 107. 09 ±7. 12) ng/L比( 0. 63 ±0. 56) ng/L, P lt;0. 05; 1. 39 ±0. 04 比0. 05 ±0. 01, P lt;0. 05] , 細(xì)胞內(nèi)cAMP表達(dá)顯著降低[ ( 17. 58 ±3. 62) ng/L 比( 32. 39 ±3. 36) ng/L, P lt;0. 05] 。地塞米松與致敏血清同時(shí)干預(yù)后, 上清中Eotaxin 水平[ ( 64. 18 ±4. 04) ng/L] 和胞內(nèi)Eotaxin mRNA( 0. 77 ±0. 19) 表達(dá)較哮喘組顯著降低, 細(xì)胞內(nèi)cAMP 表達(dá)顯著升高[ ( 58. 99 ±5. 94) ng/L] ( P lt; 0. 05) 。上清Eotaxin 水平與胞內(nèi)cAMP 水平呈負(fù)相關(guān)( r= - 0. 788, P lt;0. 01) 。結(jié)論 氣道平滑肌細(xì)胞在致敏狀態(tài)下Eotaxin 基因和蛋白表達(dá)均顯著增強(qiáng), 可能作為炎性自分泌細(xì)胞分泌炎癥因子, 通過(guò)cAMP 信號(hào)途徑參與哮喘的發(fā)生。
目的 觀察COPD 大鼠氣道平滑肌細(xì)胞( ASMCs) 的鈣激活性鉀通道( KCa ) 的活性變化, 以及11, 12-表氧化二十碳三烯酸( 11, 12-EETs) 對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞KCa 的作用。方法 40 只雄性SD 大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組和COPD 組, 每組20 只。在相對(duì)密閉艙內(nèi)吸入紙煙建立COPD 動(dòng)物模型, 采用急性酶分離法分離大鼠ASMCs, 應(yīng)用膜片鉗技術(shù), 分離出KCa 電流, 測(cè)定KCa 開放概率( Po) 、平均開放時(shí)間( To) 和平均關(guān)閉時(shí)間( Tc) 。比較COPD 組和正常對(duì)照組KCa上述活性指標(biāo)的變化, 以及應(yīng)用3 μmol / L 的11, 12-EETs 對(duì)COPD 組ASMCs 細(xì)胞進(jìn)行灌流后KCa活性的變化。結(jié)果 與正常對(duì)照組比較, COPD 組ASMCs 的KCa 通道Po 明顯降低( 0. 084 ±0. 028 比0. 198 ±0. 029, P lt;0. 01) , To 顯著縮短[ ( 0.732 ±0. 058) ms 比( 1. 648 ±0. 152) ms, P lt; 0. 01] , Tc 顯著延長(zhǎng)[ ( 12. 259 ±2. 612) ms 比( 6. 753 ±1. 237) ms, P lt; 0. 01] 。而用11, 12-EETs 灌流ASMCs 細(xì)胞后可明顯激活KCa活性, Po 增加( 0.227 ±0. 059 比0. 084 ±0. 028, P lt; 0. 01) , To 延長(zhǎng)[ ( 2.068 ±0. 064) ms 比( 0. 732 ±0. 058) ms, P lt;0. 01] , Tc 縮短[ ( 4. 273 ±0. 978) ms 比( 12. 259 ±2. 612) ms, P lt; 0. 01] 。結(jié)論 COPD大鼠ASMCs 細(xì)胞KCa通道活性降低可能在COPD 發(fā)病機(jī)制中起著一定作用, 11, 12-EETs 可以直接激活COPD大鼠ASMCs 細(xì)胞KCa活性, 提高膜電位穩(wěn)定性, 從而松弛COPD大鼠氣道平滑肌。