目的 觀察氣道平滑肌細(xì)胞經(jīng)哮喘致敏血清刺激后嗜酸粒細(xì)胞趨化因子( Eotaxin) 的表達(dá)變化, 并探討其可能的機(jī)制。方法 貼壁法體外培養(yǎng)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞。建立大鼠哮喘模型,采血收集致敏血清。用致敏血清刺激體外培養(yǎng)的氣道平滑肌細(xì)胞, 或同時(shí)予以致敏血清和地塞米松干預(yù)。采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定培養(yǎng)液上清中Eotaxin 水平, 放射免疫法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷( cAMP) 表達(dá), 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)半定量檢測(cè)細(xì)胞中Eotaxin mRNA 表達(dá)。結(jié)果 致敏血清干預(yù)后,細(xì)胞培養(yǎng)上清Eotaxin 水平和細(xì)胞內(nèi)Eotaxin mRNA 表達(dá)均較正常對(duì)照組顯著升高[ ( 107. 09 ±7. 12) ng/L比( 0. 63 ±0. 56) ng/L, P lt;0. 05; 1. 39 ±0. 04 比0. 05 ±0. 01, P lt;0. 05] , 細(xì)胞內(nèi)cAMP表達(dá)顯著降低[ ( 17. 58 ±3. 62) ng/L 比( 32. 39 ±3. 36) ng/L, P lt;0. 05] 。地塞米松與致敏血清同時(shí)干預(yù)后, 上清中Eotaxin 水平[ ( 64. 18 ±4. 04) ng/L] 和胞內(nèi)Eotaxin mRNA( 0. 77 ±0. 19) 表達(dá)較哮喘組顯著降低, 細(xì)胞內(nèi)cAMP 表達(dá)顯著升高[ ( 58. 99 ±5. 94) ng/L] ( P lt; 0. 05) 。上清Eotaxin 水平與胞內(nèi)cAMP 水平呈負(fù)相關(guān)( r= - 0. 788, P lt;0. 01) 。結(jié)論 氣道平滑肌細(xì)胞在致敏狀態(tài)下Eotaxin 基因和蛋白表達(dá)均顯著增強(qiáng), 可能作為炎性自分泌細(xì)胞分泌炎癥因子, 通過cAMP 信號(hào)途徑參與哮喘的發(fā)生。
目的 探討哮喘大鼠肺臟、鼻腔、腸道黏膜免疫的相互關(guān)聯(lián)和變化規(guī)律。方法 將20只Wistar 大鼠分為對(duì)照組和哮喘組, 各10 只。采用卵白蛋白致敏和激發(fā)的方法制作哮喘模型。應(yīng)用免疫組化和原位雜交技術(shù)檢測(cè)大鼠肺組織、鼻黏膜、腸黏膜中的CD4 + 、CD8 + 淋巴細(xì)胞數(shù)量, eotaxin蛋白及其mRNA 表達(dá)。取大鼠支氣管肺泡灌洗液( BALF) 、鼻咽沖洗液、腸黏液上清液, 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)sIgA 含量。結(jié)果 哮喘組肺組織、鼻黏膜、腸黏膜中CD4 + 和CD8 + 表達(dá)較對(duì)照組增高( P lt;0. 05) , 肺組織中eotaxin 蛋白及mRNA、鼻咽沖洗液中sIgA、腸黏膜eotaxin 蛋白表達(dá)較對(duì)照組增高( P lt;0. 05) 。其余指標(biāo)兩組間水平無顯著差異。對(duì)照組大鼠eotaxin 蛋白表達(dá)在肺組織和鼻黏膜呈負(fù)相關(guān)( r= - 0. 572, P =0. 008) , 在腸黏膜和鼻黏膜呈正相關(guān)( r =0. 638, P =0. 002) ; eotaxin mRNA表達(dá)在肺組織和鼻黏膜呈正相關(guān)( r =0. 502, P = 0. 024) , 在腸黏膜和鼻黏膜呈正相關(guān)( r =0. 594, P =0. 006) 。在哮喘組, 除了eotaxin 蛋白表達(dá)在肺組織和腸黏膜呈負(fù)相關(guān)( r = - 0. 448, P = 0. 048) , 其余指標(biāo)間無顯著相關(guān)性。結(jié)論 在正常生理狀態(tài)下, 肺、鼻、大腸之間的黏膜免疫功能可能保持密切的關(guān)系或動(dòng)態(tài)平衡。但是在哮喘發(fā)病過程中, 這種平衡被破壞。
目的 分析空氣污染物的柴油廢氣顆粒( DEP) 吸入對(duì)哮喘模型大鼠的氣道嗜酸粒細(xì)胞趨化因子表達(dá)的影響。方法 以SD 雄性大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物, 利用卵白蛋白( OVA) 制備哮喘模型, 之后再給予霧化吸入DEP各1、2 及3 周。每只大鼠均于最后一次吸入結(jié)束后次日處死, 取支氣管組織和肺泡灌洗液, ELISA 法和定量PCR 分別檢測(cè)CCL11、CCL24、CCL26 的基因和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 隨著DEP吸入時(shí)間的延長, CCL24 和CCL26 的基因和蛋白表達(dá)均逐漸上升, 與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而CCL11 的基因和蛋白表達(dá)在DEP吸入后無明顯變化。結(jié)論 柴油DEP吸入加重哮喘大鼠的氣道高反應(yīng)性, 與DEP 刺激CCL24 和CCL26 趨化因子表達(dá)部分相關(guān)。