目的構(gòu)建含木薯linamarase (lis)基因的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究。方法 應(yīng)用PCR法從木薯的DNA中擴(kuò)增出lis基因，將其克隆至pcDNA3.1(+)質(zhì)粒中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1/lis。 通過脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞系HepG2，進(jìn)行G418篩選，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞系HepG2/lis，通過免疫熒光染色、RT-PCR和Western blot法鑒定lis在細(xì)胞中的表達(dá); 采用Lambert法對(duì)細(xì)胞內(nèi)lis酶的活性進(jìn)行分析; 采用MTT法觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系生長(zhǎng)曲線，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期，裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)分析其體內(nèi)成瘤特性。結(jié)果 lis基因能穩(wěn)定整合于真核細(xì)胞中，并包裝出具備β-葡萄糖苷酶活性的蛋白。lis在細(xì)胞中的穩(wěn)定表達(dá)對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)特性、細(xì)胞周期、體內(nèi)成瘤性等生物學(xué)特征并無明顯影響。 結(jié)論成功構(gòu)建含lis基因的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系，為將lis自殺基因系統(tǒng)應(yīng)用于肝癌的治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。