目的 探索體外構建人外泌汗腺樣結構的方法。 方法 取自愿捐獻的正常腋部全層皮膚，分離培養(yǎng)汗腺腺上皮細胞，倒置相差顯微鏡下觀察。將汗腺腺上皮細胞以2 × 105 個/cm2 密度接種至Matrigel 凝膠下（A 組）、凝膠上（B 組）、凝膠中（C 組），進行三維立體培養(yǎng)，激光掃描共聚焦顯微鏡、HE 染色及免疫組織化學染色觀察有無汗腺樣結構形成。 結果 原代汗腺分泌部上皮細胞接種后24 h 可見細胞貼壁，貼壁細胞呈梭形，2 ～ 3 d 后細胞呈多克隆麥粒樣生長，14 d 后細胞融合呈鋪路石樣生長，融合后的汗腺腺上皮細胞呈扁平多角形，中間有較大圓形核；第1 代細胞形態(tài)與原代極為相似；第2 代細胞形態(tài)不規(guī)則，多數(shù)伸出長偽足；第3 代細胞多呈星形狀，細胞體積大，與鄰近細胞相互融合。A 組汗腺腺上皮細胞三維立體培養(yǎng)11 d 形成管腔結構；B 組汗腺腺上皮細胞立體培養(yǎng)8 h，細胞胞漿伸長呈絲狀，與鄰近細胞相連呈管腔或半管腔形，但細胞增殖不明顯；C 組汗腺腺上皮細胞三維立體培養(yǎng)2 ～ 3 d，細胞分裂增生，增生細胞彼此緊密排列成管腔結構，中間可見明顯腔隙，隨新生細胞增多，管腔結構逐漸演變?yōu)椴灰?guī)則球形結構。激光掃描共聚焦顯微鏡觀察示C 組形成球形結構，細胞團中央有管腔結構；球形結構HE 染色示為管腔結構，免疫組織化學染色示角蛋白18、癌胚抗原表達陽性，與汗腺分泌部管狀結構極為相似。 結論 汗腺腺上皮細胞在Matrigel 凝膠中三維立體培養(yǎng)可形成汗腺樣結構。
目的探討人體外泌汗腺組織體外三維培養(yǎng)方法，并對構建的三維組織進行形態(tài)學分析。 方法取整形手術患者自愿捐贈的正常腹部全層皮膚，經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化分離人體外泌汗腺組織，以含5 ng/mL重組人EGF、25 mg/mL牛垂體提取物、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的無血清角質細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長情況。待原代細胞達80%融合后，調整細胞濃度至1×105個/mL；取0.3 mL細胞懸液與0.3 mL Matrigel基底膜基質混勻培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長情況。培養(yǎng)14 d后，取標本行冰凍切片，HE染色觀察細胞形態(tài)結構，免疫組織化學染色檢測細胞角蛋白7（cytokeratin 7，CK7）和CK19抗原表達。 結果倒置相差顯微鏡觀察示，經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化后大量汗腺組織游離；貼壁后3～5 d長出汗腺細胞，細胞持續(xù)分裂達2～3周，形成圍繞汗腺組織塊的環(huán)狀單層；3～4周后細胞衰老。汗腺細胞接種于Matrigel基底膜基質中2～3 d，細胞開始分裂，隨后形成小細胞團、管狀結構以及類球狀結構；約2周時混合培養(yǎng)物開始液化，培養(yǎng)終止。HE染色示部分細胞形成中空管狀結構，管壁由1～2層細胞構成，類似于在體汗腺的分泌部和導管部；免疫組織化學染色見培養(yǎng)的汗腺細胞CK7和CK19表達均呈陽性。 結論人汗腺細胞接種于Matrigel基底膜基質三維培養(yǎng)，形成的組織結構模擬了在體汗腺的組織形態(tài)結構。