目的 探討長(zhǎng)期失神經(jīng)骨骼肌在反復(fù)增殖分化過(guò)程中，肌衛(wèi)星細(xì)胞池耗竭可能的信號(hào)通路。 方 法 選用2 月齡SD 雄性大鼠9 只，體重180 ～ 200 g。以大鼠右側(cè)為實(shí)驗(yàn)側(cè)，制備腓腸肌失神經(jīng)支配模型；左側(cè)為對(duì)照側(cè)，分離顯示坐骨神經(jīng)后縫合肌肉皮膚。觀察大鼠一般情況，于術(shù)后3、7、21 d 各取3 只大鼠，切取兩側(cè)腓腸肌進(jìn)行大體觀察后，行Pax7 和MyoD 免疫熒光染色觀察及mRNA 表達(dá)檢測(cè)。 結(jié)果 9 只大鼠術(shù)后均存活。實(shí)驗(yàn)側(cè)后肢僵直，活動(dòng)受限；對(duì)照側(cè)肢體活動(dòng)自如。術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)側(cè)腓腸肌均出現(xiàn)不同程度萎縮；對(duì)照側(cè)腓腸肌較飽滿有光澤。熒光染色觀察顯示，隨失神經(jīng)時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)側(cè)MyoD 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)逐漸增多，21 d 達(dá)高峰，與對(duì)照側(cè)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。實(shí)驗(yàn)側(cè)Pax7 陽(yáng)性細(xì)胞逐漸降低，3、7 d 與對(duì)照側(cè)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。實(shí)驗(yàn)側(cè)MyoDmRNA 表達(dá)逐漸升高，21 d 達(dá)高峰，各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)側(cè)均顯著高于對(duì)照側(cè)（P lt; 0.05）；實(shí)驗(yàn)側(cè)Pax7 mRNA 表達(dá)逐漸降低，僅出現(xiàn)于3、7 d，與對(duì)照側(cè)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 長(zhǎng)期失神經(jīng)肌萎縮引發(fā)的Pax7 短暫上調(diào)提示衛(wèi)星細(xì)胞池耗竭的原因之一在于細(xì)胞難以返回靜止?fàn)顟B(tài)。
目的 構(gòu)建骨骼肌肌細(xì)胞生成素 (myogenin)基因真核表達(dá)載體 ,深入探討在骨骼肌損傷及骨骼肌失神經(jīng)萎縮的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的變化規(guī)律 ,以及病理過(guò)程。方法 含myogenin c DNA的克隆載體 p GEMT- myogenin經(jīng)限制性內(nèi)切酶 Hind 和 Xho 雙酶切 ,得到含這兩個(gè)酶切位點(diǎn)之 myogenin c DNA片段 ,T4 連接酶連接到含有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)的真核表達(dá)載體 pc DNA3,構(gòu)建出重組真核表達(dá)載體 pc DNA3- myogenin,經(jīng)凝膠電泳鑒定、酶切鑒定、PCR鑒定及 DNA測(cè)序證實(shí) c DNA片段大小和序列的正確性。結(jié)果 經(jīng)凝膠電泳鑒定、酶切鑒定、PCR鑒定證實(shí) :pc DNA3-myogenin含大小正確的 myogenin c DNA片段 ,DNA測(cè)序證實(shí)其 DNA序列正確。結(jié)論 成功地構(gòu)建了肌細(xì)胞生成素基因真核表達(dá)載體 pc DNA3- myogenin