血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cell，VEC）是襯于血管內(nèi)表面的單層扁平上皮細(xì)胞，是血液與組織的之間的重要屏障。它在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，血栓形成，內(nèi)皮細(xì)胞介導(dǎo)的血管舒張，內(nèi)皮再生等病理生理過(guò)程中起關(guān)鍵作用，這些過(guò)程受到多種復(fù)雜機(jī)制的調(diào)控。隨著人們對(duì)于血管內(nèi)皮細(xì)胞功能研究的深入，microRNA在內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)揮其功能時(shí)的調(diào)控作用受到越來(lái)越多的關(guān)注。多種microRNA可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)，影響內(nèi)皮細(xì)胞的功能，本文對(duì)microRNA在內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)、血栓形成、血管舒張、內(nèi)皮再生功能的調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行綜述。
目的 探討預(yù)存糖原對(duì)肝部分切除術(shù)中熱缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法 將38 例Child A-B 級(jí)擬行肝部分切除的原發(fā)性肝癌患者按入院順序分為試驗(yàn)組及對(duì)照組，每組19 例。試驗(yàn)組于術(shù)前24 h 內(nèi)靜脈滴注高濃度葡萄糖，對(duì)照組不做特殊處理。兩組患者均采用阻斷第一肝門方法行病變肝臟切除術(shù)。抽血檢驗(yàn)所有患者術(shù)前及術(shù)后第1、5 天的肝功能情況。分別于缺血前、缺血后及再灌注2 h 獲取正常肝組織，檢測(cè)所有患者肝組織糖原含量、缺血前、缺血后及再灌注2 h 肝組織超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用實(shí)時(shí)定量PCR 方法檢測(cè)肝門阻斷前及再灌注2 h 后肝組織Bcl- 2 mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果 試驗(yàn)組肝組織糖原含量明顯高于對(duì)照組（Plt;0.01），術(shù)后第1、5 天肝臟功能優(yōu)于對(duì)照組（Plt;0.05），在缺血后、再灌注2 h 其SOD 活性高于對(duì)照組（Plt;0.05），再灌注2 h 后試驗(yàn)組Bcl-2 mRNA 表達(dá)上調(diào)高于對(duì)照組。結(jié)論 術(shù)前預(yù)存糖原可顯著減輕患者肝切除術(shù)中因?qū)嵤└伍T阻斷所導(dǎo)致的缺血再灌注損傷，其機(jī)制可能與預(yù)存糖原上調(diào)肝臟Bcl-2 mRNA 轉(zhuǎn)錄有關(guān)。
目的 探討短發(fā)夾RNA（shRNA）靶向沉默DLL4基因?qū)CF-7細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)及對(duì)化療藥物多西他賽的增敏作用。方法 針對(duì)DLL4基因的序列設(shè)計(jì)具有特異性的shRNA，經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞，作為實(shí)驗(yàn)組，空脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的MCF-7細(xì)胞為脂質(zhì)體組，未做任何處理的MCF-7細(xì)胞為對(duì)照組。采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)3組細(xì)胞DLL4蛋白的表達(dá)情況；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)3組細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期改變；采用噻唑藍(lán)（methyl- thiazoyl-tetrazolium bromide，MTT）法測(cè)定3組細(xì)胞的增殖情況及對(duì)多西他賽的敏感性。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組平均光密度值及陽(yáng)性面積率均低于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在24h、48h及72h時(shí)間點(diǎn)A值均低于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.01）； 轉(zhuǎn)染后24 h、48 h、72 h及96 h，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；RNA干擾（RNAi）沉默DLL4基因后，實(shí)驗(yàn)組G2/M期細(xì)胞比例高于對(duì)照組和脂質(zhì)體組（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組的IC50值較對(duì)照組和脂質(zhì)體組低（P＜0.05）。結(jié)論 RNAi技術(shù)抑制DLL4基因的表達(dá)能夠抑制MCF-7細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)多西他賽作用的敏感性。DLL4可能會(huì)成為乳腺癌治療的重要靶點(diǎn)。
目的 構(gòu)建信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3（STAT 3）基因短發(fā)夾RNA（shRNA）表達(dá)質(zhì)粒，探討STAT 3抑制后對(duì)胃癌MKN-45細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲的影響。 方法 根據(jù)STAT 3 mRNA 編碼序列，設(shè)計(jì)RNA干擾靶點(diǎn)，構(gòu)建STAT 3基因的特異性小RNA干擾質(zhì)粒 （psiRNA-H1/STAT 3） ，使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MKN-45細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、psiRNA-H1轉(zhuǎn)染組和psiRNA-H1/STAT 3轉(zhuǎn)染組。通過(guò)RT-PCR和Western blot檢測(cè)STAT 3特異性小RNA干擾基因?qū)ξ赴┘?xì)胞STAT 3 mRNA和蛋白表達(dá)的影響； MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率； 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后對(duì)MKN-45細(xì)胞凋亡的影響； 采用Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后MKN-45細(xì)胞侵襲力的變化。結(jié)果 成功轉(zhuǎn)染重組體的MKN-45細(xì)胞中STAT 3 mRNA和蛋白表達(dá)明顯下降（ P ＜ 0.05）。psiRNA-H1/STAT 3轉(zhuǎn)染組各時(shí)相均明顯抑制MKN-45細(xì)胞生長(zhǎng)，且MKN-45細(xì)胞凋亡率為34.26% ，相比對(duì)照組（3.75% ）和psiRNA-H1轉(zhuǎn)染組（4.43% ）明顯升高（ P ＜ 0.01） 。另外，psiRNA-H1/STAT 3轉(zhuǎn)染組MKN-45細(xì)胞侵襲力較另外2組明顯減弱（ P ＜ 0.01）。結(jié)論 成功構(gòu)建了針對(duì)STAT 3基因的shRNA表達(dá)載體，通過(guò)轉(zhuǎn)染MKN-45細(xì)胞，在體外能有效抑制人胃癌細(xì)胞STAT 3 mRNA和蛋白表達(dá)，細(xì)胞增殖、侵襲能力減弱并且促進(jìn)細(xì)胞凋亡，為STAT 3基因靶向治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
目的 研究?jī)?nèi)皮素-3(endothelin-3,ET-3)mRNA的表達(dá)水平與急性胰腺炎時(shí)胰腺炎癥程度的關(guān)系。方法 將54只SD大鼠編號(hào)后隨機(jī)分為4組，其中假手術(shù)組9只，胰腺炎組、動(dòng)脈給藥組和靜脈給藥組〔多巴胺： 5 μg/（kg·min）〕各15只，按Aho法用4.5%牛磺膽酸鈉膽胰管逆行注射制作急性胰腺炎模型，分別在1、6及24 h取胰腺組織,采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)ET-3基因的轉(zhuǎn)錄水平，并觀察各組胰腺組織病理變化，確定ET-3 mRNA的表達(dá)水平與胰腺炎炎癥程度的關(guān)系。結(jié)果 模型制作后1、6及24 h均可見(jiàn)到ET-3 mRNA表達(dá)，各組（除假手術(shù)組外）均以6 h時(shí)ET-3 mRNA表達(dá)最強(qiáng)。除1 h外，動(dòng)脈給藥組ET-3 mRNA表達(dá)量明顯低于靜脈給藥組及胰腺炎組（P＜0.05，P＜0.01）； 而假手術(shù)組在任何時(shí)相均明顯低于另外3組（P＜0.05，P＜0.01）。各組胰腺組織病理學(xué)評(píng)分按假手術(shù)組→動(dòng)脈給藥組→靜脈給藥組→胰腺炎組的順序逐漸升高。結(jié)論 ET-3 mRNA的表達(dá)與胰腺炎炎癥程度有一定關(guān)系，ET-3 mRNA表達(dá)量隨胰腺炎嚴(yán)重程度的加重而增加； 急性胰腺炎中，多巴胺動(dòng)脈給藥比靜脈給藥有效。
目的 運(yùn)用siRNA技術(shù)在肝癌細(xì)胞株中建立穩(wěn)定低表達(dá)人胰島素樣生長(zhǎng)因子1類受體（IGF1R）基因的細(xì)胞株。方法 構(gòu)建包含封閉IGF1R基因的真核表達(dá)載體pSUPER-IGF1R-siRNA，轉(zhuǎn)染SMMC7721和Hep3B細(xì)胞，G418篩選表達(dá)穩(wěn)定的細(xì)胞株。通過(guò)RT-PCR、Western-blot分析與鑒定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclin B1蛋白的表達(dá)，并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。結(jié)果 在SMMC7721和Hep3B細(xì)胞中成功建立低表達(dá)IGF1R基因的細(xì)胞株，其生長(zhǎng)明顯減慢(P＜0.05),且其cyclin D1表達(dá)亦明顯下降(P＜0.05)。結(jié)論 pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B細(xì)胞的生長(zhǎng)。
目的 研究RNA干擾(RNAi)對(duì)兔血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）bcl-2基因表達(dá)的干擾效應(yīng)。方法 用脂質(zhì)體法將構(gòu)建的裝載靶向bcl-2基因小干擾性RNA(siRNA)的表達(dá)載體(pshRNA-bcl-2質(zhì)粒)轉(zhuǎn)染VSMCs（基因組），以轉(zhuǎn)染空載體的細(xì)胞和加DMEM的空白細(xì)胞作為對(duì)照，采用半定量RT-PCR 和Western blot法檢測(cè)bcl-2基因的表達(dá)，用MTT法檢測(cè)VSMCs生長(zhǎng)情況。結(jié)果 轉(zhuǎn)染siRNA的表達(dá)載體可以抑制內(nèi)源性bcl-2基因在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯水平上的表達(dá)，基因組bcl-2的mRNA和蛋白表達(dá)較空載體組和空白對(duì)照組明顯減少(P＜0.01)； 基因組的VSMCs生長(zhǎng)也較空載體組和空白對(duì)照組明顯受到抑制(P＜0.01)。結(jié)論 載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)可明顯抑制內(nèi)源性bcl-2基因的表達(dá)和VSMCs生長(zhǎng)
【摘要】目的 探討RNA干擾(RNA interference， RNAi)技術(shù)在大腸癌基因治療研究中的應(yīng)用。方法 復(fù)習(xí)近幾年的相關(guān)文獻(xiàn)并進(jìn)行綜述。結(jié)果 RNAi能夠高效特異地沉默同源基因表達(dá)，可在大腸癌發(fā)生、發(fā)展多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用。結(jié)論 RNAi技術(shù)為大腸癌基因治療研究開(kāi)辟了新的途徑。
目的觀察反義DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3b（DNMT3b）基因真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染對(duì)人膽管癌QBC-939細(xì)胞中DNMT3b基因表達(dá)的影響。方法構(gòu)建反義DNMT3b基因真核表達(dá)載體，通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到人膽管癌細(xì)胞株QBC-939中，G418篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，PCR鑒定外源性neoR基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的表達(dá)以確定轉(zhuǎn)染是否成功。半定量RT-PCR觀察轉(zhuǎn)染前后DNMT3b基因mRNA水平的變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后DNMT3b蛋白的變化。 結(jié)果反義DNMT3b基因真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染能使人膽管癌QBC-939細(xì)胞中DNMT3b基因的mRNA水平從0.956±0.053降低至0.209±0.023，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）； 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，DNMT3b蛋白水平從(75.38±3.22)%降低到(29.87±3.46)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論反義DNMT3b基因轉(zhuǎn)染能降低人膽管癌QBC-939細(xì)胞中DNMT3b基因的表達(dá)水平，為研究DNMT3b基因功能及其在膽管癌細(xì)胞中的作用提供了方法和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
目的 探討大腸癌患者外周血CK20 mRNA的表達(dá)及其意義。 方法 用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)42例大腸癌患者術(shù)前、術(shù)后外周血及20例大腸癌患者新鮮癌組織標(biāo)本中CK20 mRNA的表達(dá)，另以20例健康成年自愿者作對(duì)照。 結(jié)果 42例大腸癌患者外周血CK20 mRNA呈陽(yáng)性表達(dá)者術(shù)前為19例（45.24%），術(shù)后為14例（33.33%）； 20例大腸癌患者新鮮癌組織中CK20 mRNA表達(dá)均為陽(yáng)性。而正常對(duì)照組20例外周血CK20 mRNA表達(dá)均為陰性。且大腸癌外周血CK20 mRNA陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)類型無(wú)關(guān)（Pgt;0.05），但與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移及Dukes分期有關(guān)（P＜0.05）。 結(jié)論 檢測(cè)外周血中CK20 mRNA表達(dá)將有助于大腸癌的早期診斷、預(yù)后的判斷及治療方案的制定。