目的 構(gòu)建人microRNA-210（miR-210）慢病毒重組載體并轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株（human umbilical vein endothelial cells 12，HUVE-12），探討其過表達(dá)對HUVE-12 成血管的影響，為研究血管再生機(jī)制提供實驗?zāi)Ｐ?。方?構(gòu)建pGCSIL-GFP-pre-miR-210 重組質(zhì)粒表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染HUVE-12，熒光顯微鏡觀察GFP 陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)及實時熒光定量PCR 法檢測miR-210 表達(dá)變化；細(xì)胞分為空病毒對照組（LV-GFP 對照組）和miR-210 轉(zhuǎn)染組（LV-miR-210-GFP 組），流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞ephrinA3 表達(dá)變化；ELISA 檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF 含量；將兩組細(xì)胞分別接種于Matrigel 觀察血管形成能力。 結(jié)果 重組載體經(jīng)酶切、測序鑒定正確，GFP 表達(dá)強(qiáng)度在轉(zhuǎn)染后48 ～ 72 h 達(dá)峰值；實時熒光定量PCR 檢測結(jié)果顯示：LV-miR-210-GFP 組miR-210 表達(dá)水平較LV-GFP 對照組增加9.72 倍（t= —11.10，P=0.00）。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示LV-miR-210-GFP 組ephrinA3 陽性細(xì)胞率為12.52% ± 0.67%，明顯較LV-GFP 對照組（73.22% ± 1.45%）降低（t= —66.12，P=0.00）；ELISA 檢測結(jié)果顯示LV-miR-210-GFP 組細(xì)胞上清中VEGF 含量顯著高于LV--GFP 對照組（[ 305.29 ± 16.52）pg/mL vs.（42.52 ± 3.11）pg/mL]（t= —27.06，P=0.00）；血管形成能力實驗顯示LV-miR-210-GFP 組毛細(xì)血管管腔數(shù)為17.33 ± 6.33，較LV-GFP 對照組（6.33 ± 2.33）顯著增加（t= —2.83，P=0.04）。 結(jié)論 成功構(gòu)建miR-210 慢病毒重組載體，并能在HUVE-12 中穩(wěn)定表達(dá)，過表達(dá)miR-210 能明顯增強(qiáng)HUVE-12 血管形成能力，為進(jìn)一步研究miR-210 調(diào)控血管新生的分子機(jī)制奠定了實驗基礎(chǔ)。