目的 探討不同劑量X線照射對人結(jié)直腸癌Caco2細(xì)胞系中microRNA-221 （miR-221）和張力蛋白在10號染色體上同源缺失的磷酸酶（PTEN）表達(dá)的影響。方法 常規(guī)培養(yǎng)Caco2細(xì)胞系并分為5組，分別給予不同劑量（0、2、4、6及8 Gy） 的X射線照射，24 h后提取細(xì)胞總RNA和蛋白質(zhì)，應(yīng)用real-time RT-PCR方法檢測Caco2細(xì)胞中miR-221和PTEN mRNA的表達(dá)水平，用Western-blot法檢測PTEN蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 Caco2細(xì)胞系在不同劑量的X線照射下，其miR-221表達(dá)水平隨著照射劑量的增加而增高，呈劑量依賴性（P＜0.01）；PTEN mRNA的表達(dá)水平無明顯變化（P＞0.05），但PTEN蛋白表達(dá)水平則隨X線照射劑量的增加而逐漸降低，亦呈劑量依賴效應(yīng)（P＜0.01）。結(jié)論 X線照射劑量可影響結(jié)直腸癌Caco2細(xì)胞中miR-221和PTEN蛋白的表達(dá)。
目的研究大鼠坐骨神經(jīng)損傷后近、遠(yuǎn)側(cè)斷端組織中微小 RNA-221（microRNA-221，miR-221）以及磷酸酶與張力蛋白同源物（phosphatase and tension protein homologue，PTEN）的表達(dá)情況，及其與周圍神經(jīng)損傷修復(fù)的相關(guān)性，以期為臨床診治周圍神經(jīng)損傷提供新靶點。方法取 SPF 級雄性 SD 大鼠 96 只建立坐骨神經(jīng)損傷模型，分別于術(shù)后 0（術(shù)后即刻）、1、4、7 d 處死 24 只大鼠，無菌條件下取坐骨神經(jīng)近、遠(yuǎn)側(cè)斷端組織。實時熒光定量 PCR 檢測 miR-221 表達(dá)，Western blot、免疫熒光染色檢測 PTEN 蛋白表達(dá)，采用雙熒光素酶報告基因驗證 miR-221 與 PTEN 的調(diào)控關(guān)系；同時結(jié)合透射電鏡觀察神經(jīng)組織超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果實時熒光定量 PCR、Western blot 及免疫熒光染色檢測示，術(shù)后大鼠坐骨神經(jīng)近、遠(yuǎn)側(cè)斷端組織中 miR-221 相對表達(dá)量均逐漸增加，PTEN 蛋白相對表達(dá)量均逐漸減少，術(shù)后各時間點間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。術(shù)后 1、4、7 d 近側(cè)斷端 miR-221 相對表達(dá)量均顯著高于遠(yuǎn)側(cè)斷端，PTEN 蛋白相對表達(dá)量均顯著低于遠(yuǎn)側(cè)斷端，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。雙熒光素酶報告基因示 PTEN 為 miR-221 作用靶點。透射電鏡觀察示隨術(shù)后時間延長，雪旺細(xì)胞增殖及軸突、髓鞘潰變逐漸增加；術(shù)后 1 d 近、遠(yuǎn)側(cè)斷端無明顯差異，4、7 d 時近側(cè)斷端雪旺細(xì)胞增殖較遠(yuǎn)側(cè)斷端增多，軸突、髓鞘潰變程度降低。結(jié)論大鼠坐骨神經(jīng)損傷后，miR-221 表達(dá)上調(diào)，靶向調(diào)控 PTEN 表達(dá)降低，進而產(chǎn)生近、遠(yuǎn)側(cè)斷端 miR-221 及 PTEN 表達(dá)差異，這一現(xiàn)象可能對促進周圍神經(jīng)損傷后修復(fù)發(fā)揮一定作用。