四川大學(xué)華西醫(yī)院骨科李箭和唐新教授團(tuán)隊(duì)于2017年11月在Osteoarthritis Cartilage發(fā)表文章 “Lentiviral vector-mediated shRNAs targeting a functional isoform of the leptin receptor (Ob-Rb) inhibit cartilage degeneration in a rat model of osteoarthritis” （影響因子：4.879 ）（長按下方二維碼即可閱讀原文）。

近年來，骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）治療方法得到大力發(fā)展，但治療效果仍不夠理想。瘦素（leptin）作為肥胖與OA之間的代謝性鏈接，是改善OA病情藥物的潛在靶點(diǎn)。大量研究表明，通過抑制leptin的表達(dá)，可以顯著改善OA的系列臨床指標(biāo)。然而，人體內(nèi)脂肪組織和關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨、滑膜、髕下脂肪墊及骨贅等均能分泌leptin。因此，僅阻斷軟骨細(xì)胞的leptin表達(dá)不足以完全阻止其對(duì)關(guān)節(jié)軟骨的有害作用。我們?cè)O(shè)想，如果能通過阻斷軟骨細(xì)胞上的leptin受體（Ob-Rb）表達(dá)，可能更有效地阻斷l(xiāng)eptin對(duì)OA關(guān)節(jié)軟骨的有害作用?；诖耍狙芯客ㄟ^構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的短發(fā)卡狀RNA（lentiviral vector-mediated small hairpin RNA，LV-shRNA），下調(diào)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Ob-Rb表達(dá)，探索Ob-Rb表達(dá)下調(diào)對(duì)OA關(guān)節(jié)軟骨退變和OA相關(guān)因子表達(dá)的影響。。。。。。四川大學(xué)華西醫(yī)院骨科李箭和唐新教授團(tuán)隊(duì)于2017年11月在Osteoarthritis Cartilage發(fā)表文章 “Lentiviral vector-mediated shRNAs targeting a functional isoform of the leptin receptor (Ob-Rb) inhibit cartilage degeneration in a rat model of osteoarthritis” （影響因子：4.879 ）（長按下方二維碼即可閱讀原文）。。。。

體外研究：優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件后，使用最佳LV-shRNA3和陰性對(duì)照慢病毒LV-NTC轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞，采用qRT-PCR和Western blot從mRNA和蛋白水平檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的軟骨細(xì)胞Ob-Rb表達(dá)，以及相關(guān)前炎性因子、合成代謝因子和分解代謝因子的表達(dá)情況。

結(jié)果顯示，LV-shRNA3顯著降低大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Ob-Rb表達(dá)。與LV-NTC組相比，LV-shRNA3組前炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表達(dá)顯著降低；合成代謝因子COLⅡmRNA表達(dá)顯著升高；分解代謝因子ADAMTS-5、MMP-9、COX-2和NOS-2 mRNA表達(dá)顯著降低。見圖1、2。

圖1　Western blot檢測(cè)示優(yōu)化的LV-shRNA3顯著降低大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Ob-Rb表達(dá)

圖2　qRT-PCR檢測(cè)顯示LV-shRNA3顯著降低TNF-α、IL-1β、IL-6、ADAMTS-5、MMP-9、COX-2和NOS-2 mRNA表達(dá)，增加COLⅡmRNA表達(dá)

體內(nèi)研究：96只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。后三組大鼠制備OA模型后，分別注射PBS、LV-NTC以及LV-shRNA。術(shù)后2、4、8、12周取各組膝關(guān)節(jié)軟骨行甲苯胺藍(lán)染色，采用國際骨關(guān)節(jié)炎研究協(xié)會(huì)-骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織學(xué)評(píng)分系統(tǒng)（OARSI）進(jìn)行評(píng)分；取術(shù)后4周關(guān)節(jié)軟骨行OA相關(guān)因子免疫組織化學(xué)染色分析。

結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4、8、12周大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨OARSI評(píng)分顯著降低；術(shù)后4周Ob-Rb表達(dá)水平顯著降低，ADAMTS-5和MMP-9的表達(dá)也顯著降低，而軟骨基質(zhì)中COLⅡ的表達(dá)水平升高。見圖3、4。

圖3　術(shù)后4、8、12周各組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨甲苯胺藍(lán)染色及OARSI評(píng)分

圖4　術(shù)后4周各組Ob-Rb免疫組織化學(xué)染色和半定量分析 

結(jié)論  

LV-shRNA3下調(diào)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Ob-Rb表達(dá)后，可以明顯抑制大鼠OA模型關(guān)節(jié)軟骨退變，表明Ob-Rb可能是OA治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。

康鵬德教授：肥胖是誘發(fā)OA的重要因素之一，leptin被認(rèn)為是肥胖與OA發(fā)生之間的一個(gè)重要蛋白， leptin通過與關(guān)節(jié)軟骨表面受體（Ob-Rb）結(jié)合，導(dǎo)致軟骨代謝分化異常、軟骨破壞誘發(fā)OA，對(duì)其干預(yù)、調(diào)控有望成為預(yù)防、治療肥胖相關(guān)OA的一個(gè)重要靶點(diǎn)。李箭、唐新團(tuán)隊(duì)在前期研究基礎(chǔ)上，通過構(gòu)建LV-shRNA3阻抑關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞表達(dá)Ob-Rb，進(jìn)而影響相關(guān)炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6，以及軟骨合成與分解代謝相關(guān)因子COLⅡ、ADAMTS-4、ADAMTS-5、 MMP-9、COX-2、NOS-2等的表達(dá)，最終調(diào)控軟骨細(xì)胞代謝。體內(nèi)研究表明，阻抑Ob-Rb表達(dá)可有效地阻斷l(xiāng)eptin對(duì)OA關(guān)節(jié)軟骨的損害作用，減緩或預(yù)防大鼠OA發(fā)生及OA程度。

此研究結(jié)果能在Osteoarthritis Cartilage發(fā)表主要基于以下因素：①良好的前期研究基礎(chǔ)和相關(guān)研究積累鋪墊；②科學(xué)問題、科學(xué)假設(shè)具有較好的科學(xué)性和創(chuàng)新性；③研究設(shè)計(jì)合理、方法正確，結(jié)合先進(jìn)的研究手段驗(yàn)證所提科學(xué)問題，體外、體內(nèi)研究逐步深入；數(shù)據(jù)詳實(shí)、充分，表格設(shè)計(jì)合理，圖片清晰；④論文撰寫邏輯清晰，討論重點(diǎn)突出，語言流暢，英文撰寫規(guī)范、嚴(yán)謹(jǐn)、科學(xué)。此研究對(duì)于揭示肥胖與OA發(fā)生、發(fā)展的分子病理機(jī)制、對(duì)探索研究OA 治療新的靶點(diǎn)提供重要的理論依據(jù)，對(duì)于開發(fā)OA預(yù)防、治療藥物具有一定借鑒和指導(dǎo)價(jià)值。

此研究屬于國家自然基金支持項(xiàng)目。由于本研究部分結(jié)果未完全達(dá)到預(yù)期，文章撰寫之初研究團(tuán)隊(duì)部分人員對(duì)文章質(zhì)量信心不足，認(rèn)為該文只能發(fā)表在一般雜志。然而，本課題的負(fù)責(zé)人堅(jiān)持認(rèn)為本研究具有較高創(chuàng)新性，且目前研究結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)走在前沿，足以支持預(yù)期設(shè)想，因此主張先投學(xué)科領(lǐng)域最高雜志Osteoarthritis Cartilage。文章撰寫時(shí)我們不回避部分研究結(jié)果未達(dá)預(yù)期這一事實(shí)，投稿前經(jīng)團(tuán)隊(duì)人員反復(fù)論證和修改，投稿后經(jīng)歷一輪大修后很快被接受。此次文章發(fā)表極大鼓勵(lì)了研究團(tuán)隊(duì)的信心，通過這次投稿，我們認(rèn)為對(duì)于任何類型研究，只要努力用心，即使結(jié)果不完全盡如人意，但是只要把握了當(dāng)前熱點(diǎn)問題，敢于“亮劍”，成功的機(jī)會(huì)仍然很大。

四川大學(xué)華西醫(yī)院運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)中心

本文編輯：劉　丹

本文排版：陳紅梅　張洪雪