四川大學(xué)華西醫(yī)院胃腸外科胡建昆教授團(tuán)隊(duì)、生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室許恒教授、彭勇教授團(tuán)隊(duì)于2018年6月在Nature Communications（影響因子11.87）發(fā)表文章“Prognostic significance of frequent CLDN18-ARHGAP26/6 fusion in gastric signet-ring cell cancer”（點(diǎn)擊下方二維碼即可閱讀原文）。

胃印戒細(xì)胞癌是胃癌中臨床病理性質(zhì)特殊的一種組織學(xué)亞型，與非印戒細(xì)胞癌相比，其患者平均年齡更低，女性比例更高，進(jìn)展期腫瘤多見(jiàn)。本研究首先對(duì)四川大學(xué)華西醫(yī)院胃癌數(shù)據(jù)庫(kù)中2006年至2012年間接受外科手術(shù)切除治療的原發(fā)性胃癌病例進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)印戒細(xì)胞癌組與含印戒細(xì)胞癌組及非印戒細(xì)胞癌組病例相比年齡更低，女性病例比例更高，漿膜受累（T4期）病例所占比例更高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例更高，并且胃上部腫瘤比例更低。通過(guò)生存分析發(fā)現(xiàn)非印戒細(xì)胞癌組、含印戒細(xì)胞癌組及印戒細(xì)胞癌組術(shù)后總體五年生存率分別為57.3%、53.5%及42.4%（P<0.001）且印戒細(xì)胞癌組患者未能從化療中獲得生存獲益（P=0.649）（圖1）。。。。。四川大學(xué)華西醫(yī)院胃腸外科胡建昆教授團(tuán)隊(duì)、生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室許恒教授、彭勇教授團(tuán)隊(duì)于2018年6月在Nature Communications（影響因子11.87）發(fā)表文章“Prognostic significance of frequent CLDN18-ARHGAP26/6 fusion in gastric signet-ring cell cancer”（點(diǎn)擊下方二維碼即可閱讀原文）。。。。。

圖1　胃印戒細(xì)胞癌預(yù)后分析。a.不同病理類(lèi)型胃癌病例預(yù)后分析；b. 非印戒細(xì)胞癌病例化療與預(yù)后分析；c. 印戒細(xì)胞癌病例化療與預(yù)后分析

全基因組測(cè)序技術(shù)作為目前腫瘤學(xué)研究領(lǐng)域最為熱門(mén)的技術(shù)之一，可從基因組水平分析基因突變與腫瘤發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。為進(jìn)一步探尋與胃印戒細(xì)胞癌臨床病理及預(yù)后可能相關(guān)的分子事件，本研究對(duì)32例胃印戒細(xì)胞癌組織樣本進(jìn)行全基因組測(cè)序并結(jié)合生物信息學(xué)分析方法，發(fā)現(xiàn)6個(gè)顯著突變基因，其分別為TP53（25%），CDH1（15.6%），PIK3CA（12.5%），HIST1H4E（6.3%），LCE1F（6.3%）以及OR8J1（6.3%）。同時(shí)，檢測(cè)腫瘤組織樣本中潛在的融合基因，發(fā)現(xiàn)了GDAP2-PTPRN2、DDR2-TRIM45、RABGAP1L-DARS2、NCOR2-MIPEP、TP53-TP53和CLDN18-ARHGAP26/6等基因融合的現(xiàn)象，其中CLDN18-ARHGAP26/6融合基因在8例（25%）胃印戒細(xì)胞癌組織樣本中存在表達(dá)（圖2-3）。

圖2　32例胃印戒細(xì)胞癌基因突變圖譜

圖3　胃印戒細(xì)胞癌體細(xì)胞拷貝數(shù)變異和結(jié)構(gòu)變異。a. CIRCOS圖；b. CLDN18-ARHGAP26/6基因融合示意圖

為驗(yàn)證CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃印戒細(xì)胞癌臨床病理特征間的關(guān)系，本研究收集2009年至2014年華西醫(yī)院胃癌腫瘤組織樣本進(jìn)行擴(kuò)大驗(yàn)證，結(jié)果顯示總共73例樣本（9.2%，73/829）中存在CLDN18-ARHGAP26/6融合基因，且該融合基因表達(dá)與性別（P<0.001）、年齡（P<0.001）、組織學(xué)類(lèi)型（P<0.001）以及N分期（P<0.001）顯著相關(guān)。校正分期等混雜因素后進(jìn)行生存分析，本研究發(fā)現(xiàn)攜帶CLDN18-ARHGAP26/6融合基因的胃癌患者預(yù)后更差，且化療不影響攜帶CLDN18-ARHGAP26/6融合基因病例的預(yù)后，而不攜帶CLDN18-ARHGAP26/6融合基因的患者卻能通過(guò)化療取得生存獲益（圖4）。

圖4　擴(kuò)大臨床樣本驗(yàn)證CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃癌化療預(yù)后間的關(guān)系

為探索CLDN18-ARHGAP26/6融合基因所引起的具體生物學(xué)功能及其與化療敏感性之間的關(guān)系，項(xiàng)目組構(gòu)建了CLDN18-ARHGAP26/6融合基因表達(dá)的胃癌細(xì)胞株，通過(guò)分子生物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了CLDN18-ARHGAP26/6融合基因顯著提高了細(xì)胞的遷移能力，且CLDN18-ARHGAP26/6融合基因表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株對(duì)奧沙利鉑與氟尿嘧啶的耐藥性均呈提高趨勢(shì)（圖5）。

圖5　構(gòu)建CLDN18-ARHGAP26/6融合基因過(guò)表達(dá)細(xì)胞株，探尋其對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移及化療藥物敏感性的影響

該研究通過(guò)對(duì)胃印戒細(xì)胞癌這一特殊類(lèi)型的胃癌進(jìn)行研究，揭示了CLDN18-ARHGAP26/6融合基因可能是影響胃印戒細(xì)胞癌的特征性突變基因，其與胃印戒細(xì)胞癌成分比例、性別、腫瘤侵襲性密切相關(guān)。在后續(xù)臨床分析及基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)該融合基因與胃癌化療耐藥密切相關(guān)，并通過(guò)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該現(xiàn)象。該研究結(jié)果為后續(xù)胃印戒細(xì)胞癌化療敏感性相關(guān)研究提出了新思路，為后續(xù)胃印戒細(xì)胞癌患者化療藥物篩選以及針對(duì)該融合基因的靶治療藥物設(shè)計(jì)提供了理論基礎(chǔ)。

李秋教授：該研究對(duì)1868例胃癌患者依據(jù)病理細(xì)胞類(lèi)型進(jìn)行了系統(tǒng)的臨床分析，發(fā)現(xiàn)印戒細(xì)胞含量與胃印戒細(xì)胞癌多種臨床特征和治療結(jié)局顯著有關(guān)，從而提出臨床問(wèn)題及科學(xué)假設(shè)。研究從臨床實(shí)際問(wèn)題出發(fā)，用臨床數(shù)據(jù)驗(yàn)證臨床問(wèn)題，然后采用全基因組測(cè)序分析探尋與該臨床問(wèn)題，既胃印戒細(xì)胞癌臨床病理及預(yù)后特征相關(guān)的分子事件。在發(fā)現(xiàn)潛在目的基因后又回歸臨床，通過(guò)大樣本臨床樣本進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證，并采用TCGA項(xiàng)目公共數(shù)據(jù)進(jìn)行外部驗(yàn)證。在發(fā)現(xiàn)胃印戒細(xì)胞癌中CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃癌患者化療結(jié)局相關(guān)后，又采用分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，在胃癌細(xì)胞系水平證實(shí)了該融合基因會(huì)導(dǎo)致胃癌細(xì)胞化療藥物抵抗。該研究思路清晰，從臨床問(wèn)題出發(fā)，采用基因組學(xué)“臨床-基礎(chǔ)-臨床-基礎(chǔ)”，逐層分析論證，逐步揭示了CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃印戒細(xì)胞癌的關(guān)系。

胃印戒細(xì)胞癌作為特殊病理類(lèi)型胃癌，其預(yù)后差，常規(guī)化療藥物效果不佳，并且，目前臨床尚無(wú)針對(duì)胃印戒細(xì)胞癌的靶向治療藥物。該研究結(jié)果提示CLDN18-ARHGAP26/6融合基因與胃印戒細(xì)胞癌的化療耐藥密切相關(guān)，這為后續(xù)胃印戒細(xì)胞癌的臨床及基礎(chǔ)研究提供了新的思路；一方面，對(duì)于診斷胃印戒細(xì)胞癌的患者是否可以進(jìn)行CLDN18-ARHGAP26/6融合基因檢測(cè)，用以預(yù)測(cè)對(duì)氟尿嘧啶/奧沙利鉑為基礎(chǔ)的胃癌常規(guī)化療敏感性；另一方面，是否可以針對(duì)CLDN18-ARHGAP26/6融合基因，設(shè)計(jì)靶向治療藥物從而逆轉(zhuǎn)該類(lèi)患者化療耐藥的現(xiàn)象，從而改善這部分患者的治療結(jié)局。雖然，這兩個(gè)假設(shè)都需要后續(xù)相關(guān)的臨床及基礎(chǔ)研究進(jìn)行驗(yàn)證及挖掘，但本研究結(jié)果無(wú)疑為后續(xù)研究提供了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

本研究涉及大量臨床數(shù)據(jù)資料和組織樣本資料，日常進(jìn)行臨床數(shù)據(jù)及組織樣本的收集與保存十分重要。若無(wú)大樣本臨床數(shù)據(jù)的支撐和分析，提出臨床假設(shè)，后續(xù)基于全基因組測(cè)序的生物信息學(xué)分析可能會(huì)迷失方向，缺乏目的性；并且基于組織樣本和對(duì)應(yīng)完整臨床隨訪(fǎng)數(shù)據(jù)才能有力發(fā)掘并驗(yàn)證目的基因所產(chǎn)生的臨床現(xiàn)象。在收集患者臨床信息及組織樣本時(shí)需要注意的是一定要進(jìn)行倫理審查與備案，并且收集采集患者的臨床數(shù)據(jù)及組織樣本均需要獲得患者的知情同意并簽署知情同意書(shū)。此外，本研究涉及對(duì)患者進(jìn)行全基因組測(cè)序，獲取了患者的基因組數(shù)據(jù)，Nature出版社對(duì)于發(fā)表論文基因組測(cè)序數(shù)據(jù)有上傳原始數(shù)據(jù)的要求，基因組數(shù)據(jù)均需要上傳至雜志社要求的基因組公共數(shù)據(jù)庫(kù)，而按照我國(guó)對(duì)于人類(lèi)遺傳資源的管理要求，人類(lèi)遺傳測(cè)序數(shù)據(jù)上傳到境外數(shù)據(jù)庫(kù)均需要完成科技部關(guān)于人類(lèi)遺傳資源數(shù)據(jù)出口出境的申報(bào)審批手續(xù)。

在文章接收進(jìn)行校稿時(shí)，雜志社要求提供原始圖片，并需要按照雜志社要求修改圖片顏色及標(biāo)示，并且需要按照雜志社要求的格式上傳。因此，在研究實(shí)施過(guò)程中，一定要注意原始數(shù)據(jù)的保存，并且圖片的格式最好保存為矢量圖，保存為.psd及.ai格式，方便按照雜志社的要求進(jìn)行調(diào)校。此外，涉及基因組分析的研究，需要把生物信息學(xué)分析的代碼進(jìn)行保存，有一些雜志社（如Nature雜志社）要求上傳分析步驟的文件。

本文編輯：張　敏

本文排版：陳紅梅　張洪雪