四川大學(xué)華西醫(yī)院趙旭東團(tuán)隊(duì)于2019年11月在Cancer Immunology Research（影響因子8.619）發(fā)表文章“Eradication of Hepatocellular Carcinoma by NKG2D-Specific CAR-T Cells”（長(zhǎng)按下方二維碼即可閱讀全文）。

。。。。據(jù)國(guó)家癌癥中心發(fā)布的2015年我國(guó)惡性腫瘤數(shù)據(jù)顯示，肝癌新發(fā)病例37萬(wàn)，位居惡性腫瘤第四位，死亡病例32.6萬(wàn)，位居惡性腫瘤第二位。目前常規(guī)治療手段對(duì)治愈晚期肝癌患者并不顯著，因此急需其它更有效的治療方式。嵌合抗原受體T細(xì)胞療法（CAR-T）是一種新型的免疫療法，目前在血液惡性腫瘤中取得了巨大成功，有望拓展至實(shí)體瘤研究領(lǐng)域。但實(shí)體瘤由于存在腫瘤異質(zhì)性、缺少腫瘤特異性抗原、免疫抑制微環(huán)境等問(wèn)題限制了CAR-T的應(yīng)用。。。。。。四川大學(xué)華西醫(yī)院趙旭東團(tuán)隊(duì)于2019年11月在Cancer Immunology Research（影響因子8.619）發(fā)表文章“Eradication of Hepatocellular Carcinoma by NKG2D-Specific CAR-T Cells”（長(zhǎng)按下方二維碼即可閱讀全文）。。。。。

NKG2D是一類表達(dá)于NK細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、部分CD4+T細(xì)胞、γδ T細(xì)胞等的一類分子。它的配體主要有MICA、MICB、ULBP1-6等，且一般在正常細(xì)胞不表達(dá)而在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)。通過(guò)分析TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)：大部分NKG2DLs在肝癌樣本中高表達(dá)，且我們?cè)谌烁伟颖拘酒▓D1）及人肝癌細(xì)胞系（SMMC-7721及MHCC97H）中檢測(cè)到MICA和ULBP2的高表達(dá)，這提示NKG2DLs可作為肝癌的靶點(diǎn)。因此我們構(gòu)建了NKG2D-BBz CAR并制備CAR-T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)NKG2D-BBz CAR-T對(duì)肝癌細(xì)胞系的殺傷依賴于NKG2DL的表達(dá)（圖2）。   

圖1　NKG2D配體MICA(A)及ULBP2（B）在肝癌樣本中的表達(dá)　

圖2　NKG2D-BBz CART殺傷依賴于NKG2DL表達(dá)　

除此之外，我們將SMMC-7721-luciferase細(xì)胞注射到NDG小鼠皮下，一周后尾靜脈回輸CART細(xì)胞。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：NKG2D-BBz CART能顯著抑制SMMC-7721裸鼠移植瘤的發(fā)生發(fā)展（圖3）。我們將瘤體組織做免疫組化染色發(fā)現(xiàn)：與對(duì)照組相比，NKG2D-BBz CART細(xì)胞在腫瘤內(nèi)部存在大量聚集并裂解腫瘤細(xì)胞。

圖3　NKG2D-BBz CAR-T 抑制肝癌的發(fā)生　

綜上所述，體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)了NKG2D-BBz CART細(xì)胞能特異性殺傷NKG2DL陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞。Celyad的NKG2D-CART臨床I期證據(jù)表明NKG2D-CART在7例急性髓系白血病和5例多發(fā)性骨髓瘤病人中沒(méi)有產(chǎn)生毒性及副作用。因此，NKG2D-CART有望發(fā)展成臨床治療NKG2DL陽(yáng)性肝癌的有效方式之一。

王瑋教授：我國(guó)每年新增肝癌病例數(shù)和死亡病例數(shù)，均占全球新增病例數(shù)和死亡病例數(shù)的一半以上，防治形勢(shì)十分嚴(yán)峻。目前晚期肝癌患者通常只能選擇化療藥物例如索菲替尼和瑞格非尼進(jìn)行保守治療，而且僅僅只增加2-3個(gè)月的生存期。因此迫切需要開(kāi)發(fā)新穎的、更有效的治療晚期肝癌的方法。近年來(lái)，以CD19為靶點(diǎn)的嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法（chimeric antigen receptor modified T,CAR-T）在治療血液系統(tǒng)腫瘤中取得了顯著的療效，以GPC3等為靶點(diǎn)的CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品在治療肝癌等實(shí)體腫瘤過(guò)程中也顯示了較好的臨床應(yīng)用前景。本論文作者以NKG2D胞外域?yàn)樽R(shí)別域，41-BB和CD3ζ為共刺激信號(hào)構(gòu)建的嵌合抗原受體T細(xì)胞，對(duì)NKG2D 配體表達(dá)陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞株在體內(nèi)和體外均具有極強(qiáng)的殺傷作用，且抗腫瘤效果與NKG2D 配體表達(dá)呈正相關(guān)。重要的是，本論文的研究者成功地完成了病人來(lái)源的T細(xì)胞的CAR-T細(xì)胞制備，為該CAR-T細(xì)胞的臨床應(yīng)用奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。

目前已經(jīng)有多個(gè)靶點(diǎn)被用作肝癌的CAR-T治療，例如GPC-3、 MUC-1 、CEA等，但是效果并不理想。肝癌作為實(shí)體瘤，其嚴(yán)重的異質(zhì)性和強(qiáng)大的免疫抑制微環(huán)境被認(rèn)為是限制CAR-T應(yīng)用的主要原因?；贜KG2D構(gòu)建的CAR-T細(xì)胞，能夠識(shí)別多種NKG2D配體，可在一定程度上克服實(shí)體瘤的異質(zhì)性；其次，該CAR-T細(xì)胞被證實(shí)對(duì)腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制細(xì)胞和新生血管細(xì)胞也有殺傷作用，讓我們不免對(duì)它的臨床治療效果又多了幾分期待。當(dāng)然，目前CAR-T治療肝癌的應(yīng)用還處于探索階段，對(duì)于CAR-T的有效性和安全性還需要更多的研究；特別是對(duì)于可溶性NKG2DL、腫瘤細(xì)胞的NKG2D 逃逸等對(duì)NKG2D CAR-T的治療效果的影響也應(yīng)給予更多的關(guān)注。

王春暉教授：據(jù)2018年發(fā)布的《中國(guó)肝癌大數(shù)據(jù)報(bào)告》顯示：原發(fā)性肝癌全球每年新發(fā)病例85.4萬(wàn)，中國(guó)46.4萬(wàn)，約占全球的55%。早期確診的肝癌患者經(jīng)過(guò)有效治療，5年的生存率超過(guò)50%。在我國(guó)肝癌患者早期診斷率低，很多患者一經(jīng)確診就已經(jīng)處于中晚期，錯(cuò)過(guò)了治療黃金期。免疫療法被認(rèn)為是最有前景的腫瘤治療手段之一。CAR-T療法已經(jīng)成功應(yīng)用于臨床非實(shí)體瘤的治療，但實(shí)體瘤由于存在異質(zhì)性、免疫抑制微環(huán)境等限制了其應(yīng)用。目前已有GPC3、AFP、MUC1、CEA等靶點(diǎn)的CART在肝癌臨床前研究中的報(bào)道，均尚未完成臨床試驗(yàn)。

近期，趙旭東研究員團(tuán)隊(duì)以NKG2D配體（NKG2DLs）為靶點(diǎn)，創(chuàng)新性探討了NKG2D-CART在肝癌中的潛在價(jià)值。該研究具有以下亮點(diǎn)：1）通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)與人肝癌樣本中發(fā)現(xiàn)NKG2DLs高表達(dá)，而人正常組織中NKG2DLs低表達(dá)。這指示NKG2DL可作為治療肝癌的潛在靶點(diǎn)。2）研究人員制備的NKG2D-BBz CART細(xì)胞能顯著殺傷NKG2DLs高表達(dá)的肝癌細(xì)胞系并抑制腫瘤生長(zhǎng)。3）肝癌患者自身免疫細(xì)胞活性較低，用患者自身T細(xì)胞制備CAR-T細(xì)胞時(shí)會(huì)影響其活性。為此，研究人員分離并制備了肝癌患者來(lái)源的NKG2D-BBz CART細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，上述病人來(lái)源的NKG2D-BBz CAR-T細(xì)胞也能顯著殺傷肝癌細(xì)胞并抑制腫瘤生長(zhǎng)。

綜上所述，論文系統(tǒng)地研究了NKG2D-BBz CART對(duì)肝癌的抑制效果，如果通過(guò)臨床試驗(yàn)證明其安全性，有望發(fā)展為臨床上治療NKG2DL陽(yáng)性肝癌的新手段。

Cancer Immunology Research由美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)（AACR）于2013年主辦，主要刊登腫瘤免疫領(lǐng)域的原創(chuàng)性成果，五年影響因子9.7。我們根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及分析腫瘤免疫領(lǐng)域的主流期刊就確定投稿此雜志。在投稿兩個(gè)月后收到修改通知：要求在3個(gè)月內(nèi)完成3個(gè)體外實(shí)驗(yàn)以及1個(gè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。在每位團(tuán)隊(duì)成員的共同努力下，終于我們按時(shí)修回文章并于一個(gè)月后收到接收通知。

總體來(lái)說(shuō)，首先對(duì)自己實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的認(rèn)識(shí)及能發(fā)表雜志的定位至關(guān)重要。其次團(tuán)隊(duì)協(xié)作非常重要，我們團(tuán)隊(duì)每個(gè)成員都具有豐富的從事腫瘤相關(guān)領(lǐng)域的經(jīng)驗(yàn)，在此基礎(chǔ)上每個(gè)人又有自己擅長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)技能。團(tuán)隊(duì)協(xié)作能力強(qiáng)，才能在最短的時(shí)間內(nèi)完成各項(xiàng)試驗(yàn)。再者，針對(duì)每個(gè)審稿專家提的意見(jiàn)和建議，我們逐條認(rèn)真回復(fù)。

本課題組以華西醫(yī)院/生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室平臺(tái)為依托，主要致力于小鼠及非人靈長(zhǎng)類新型腫瘤模型的建立；并以其為研究對(duì)象開(kāi)展腫瘤早期診斷、抗腫瘤和衰老藥物發(fā)現(xiàn)以及腫瘤免疫治療等研究。目前實(shí)驗(yàn)室研究團(tuán)隊(duì)包括1名研究員、3名助理研究員、1名博士后等11位成員。

本文編輯：汪文靜

本文排版：陳紅梅　張洪雪