目的 探討過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α( PGC-1α) 和紅系衍生的核因子相關(guān)因子2( Nrf2) 對(duì)γ-谷氨酰半胱氨酸合酶( γ-GCS) 表達(dá)的調(diào)控及其在COPD中的作用和意義。方法 24 只大鼠隨機(jī)分為COPD 組和對(duì)照組。COPD 組用每日熏香煙和兩次氣管內(nèi)滴入脂多糖( LPS) 的方法制作COPD 模型。觀察大鼠的肺組織病理學(xué)改變, 檢測(cè)肺功能指標(biāo); 應(yīng)用免疫組化、Western blot、原位雜交和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)肺組織中PGC-1α、Nrf2 和γ-GCS 的蛋白及mRNA表達(dá)情況。結(jié)果 COPD 組的肺功能指標(biāo)( FEV0. 3、FEV0. 3 /FVC、PEF) 和光鏡下COPD 組肺組織病理變化符合COPD 的特征性改變。PGC-1α、Nrf2 mRNA 在兩組大鼠肺組織中均有表達(dá), 且與γ-GCS mRNA 的表達(dá)部位基本一致; PGC-1α、γ-GCS 蛋白及mRNA 表達(dá)在COPD 組均顯著高于對(duì)照組( P 均lt;0. 05) ; Nrf2 蛋白表達(dá)在COPD 組較對(duì)照組顯著增高( P lt;0. 01) , 而Nrf2 mRNA 在兩組表達(dá)無(wú)明顯差異( P lt;0. 05) 。相關(guān)性分析顯示PGC-1α蛋白與Nrf2 蛋白及mRNA 表達(dá)均呈正相關(guān)( r 值分別為0. 775 和0. 515, P 均lt; 0. 01) , PGC-1α、Nrf2 蛋白與γ-GCS 蛋白( r 值分別為0. 531 和0. 575,P 均lt;0. 01) 及mRNA 表達(dá)( r 值分別為0. 616 和0. 634, P lt; 均0. 01) 均呈正相關(guān)。結(jié)論 PGC-1α可能作為Nrf2 的輔激活因子, 通過(guò)輔助激活Nrf2, 上調(diào)γ-GCS 的基因表達(dá); PGC-1α和Nrf2 可能通過(guò)一個(gè)共同通路協(xié)同上調(diào)γ-GCS 的基因表達(dá), 從而改善COPD 的氧化/ 抗氧化失衡。
目的 通過(guò)研究鋅指Krüppel 樣轉(zhuǎn)錄因子2( Klf2) 及紅系衍生核因子相關(guān)因子2 ( Nrf2) /BTB-CNC 異體同源體1( Bach1) 在經(jīng)香煙煙霧提取物( CSE) 刺激的大鼠氣道上皮細(xì)胞中的表達(dá), 了解其感受氧化應(yīng)激對(duì)靶基因γ-谷氨酰半胱氨酸合酶( γ-GCS) 的調(diào)控作用。方法 采用酶消化法提取大鼠原代氣管-支氣管上皮細(xì)胞, 并用10% CSE 干預(yù)細(xì)胞6 h, 收集細(xì)胞, 雙酶法檢測(cè)γ-GCS 活性; 通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察Nrf2 /Bach1 的核轉(zhuǎn)位; 采用Western blot 和RT-PCR 技術(shù)研究細(xì)胞中 Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS 的蛋白及mRNA 表達(dá)。結(jié)果 大鼠氣管-支氣管上皮細(xì)胞經(jīng)CSE 誘導(dǎo)后其 γ-GCS活性明顯增高。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示Nrf2 經(jīng)CSE 刺激后出現(xiàn)由核外向核內(nèi)的轉(zhuǎn)位, Bach1 經(jīng)CSE 刺激后出現(xiàn)由核內(nèi)向核外的轉(zhuǎn)位。Western blot 結(jié)果顯示CSE 處理組中Klf2、Nrf2、Bach1、 γ-GCS蛋白水平較對(duì)照組顯著升高( Plt;0.05) ; RT-PCR 結(jié)果顯示CSE 處理組中Klf2、Nrf2、Bach1、 γ-GCS mRNA 水平較對(duì)照組顯著升高( Plt;0.05) 。直線相關(guān)分析表明γ-GCS 蛋白表達(dá)與Klf2、Nrf2、 Bach1 呈正相關(guān)( Plt;0.05) 。結(jié)論 CSE 可能通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子Klf2、Nrf2、Bach1 調(diào)節(jié)γ-GCS 的表達(dá)。