目的 人脫細胞羊膜（human acellular amniotic membrane，HAAM）含膠原、糖蛋白、蛋白多糖、整合素和板層體等多種成分，這些成分能為細胞增殖、分化提供豐富營養(yǎng)。研究HAAM 與脂肪源性干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）的生物相容性，探討HAAM 復(fù)合ADSCs 構(gòu)建真皮替代物修復(fù)全層皮膚缺損的可能性。 方法 取健康4 月齡SD 大鼠30 只，雌雄不限，體重250 ～ 300 g，于腹股溝處獲取脂肪行ADSCs 體外分離、培養(yǎng)和傳代；取第3 代細胞行HE 染色及CD44、CD49d、CD34 免疫細胞化學染色鑒定。應(yīng)用物理和酶消化法處理自愿捐贈的人羊膜獲得HAAM，行HE 染色觀察細胞是否脫除干凈，掃描電鏡觀察HAAM 結(jié)構(gòu)特征。將第3 代ADSCs 以2 × 105 個/cm2 密度接種于HAAM 上皮面，體外共培養(yǎng)1 ～ 5 d 后分別行掃描電鏡和MTT 檢測，不加材料組設(shè)為對照組。將大鼠隨機分為3 組，每組10 只，建立背部直徑為2 cm 的全層皮膚缺損模型。A 組創(chuàng)面植入復(fù)合ADSCs 的HAAM，B 組植入單純HAAM，C 組常規(guī)包扎。術(shù)后行大體觀察，于術(shù)后1、2、4 周計算創(chuàng)面愈合率，并取創(chuàng)面皮膚行HE 染色和細胞角蛋白19（cytokeratin19，CK19）免疫組織化學染色觀察。 結(jié)果 HE 染色示第3 代ADSCs 呈梭形，胞核為橢圓形，位于細胞中央；免疫細胞化學染色示第3 代ADSCs 表達CD44 和CD49d，不表達CD34。HAAM 行HE 染色未見細胞殘留；掃描電鏡下見HAAM兩面具有不同的三維結(jié)構(gòu)，上皮面為較致密的網(wǎng)狀纖維；基質(zhì)面為較稀疏的膠原纖維，未見纖維發(fā)生融合、斷裂和降解。ADSCs-HAAM 復(fù)合培養(yǎng)3 d 后掃描電鏡下可見細胞生長狀態(tài)良好，胞體肥大呈梭形隆起，胞膜外絨毛致密略有彎曲，胞體下方形成豐富的偽足牢固黏附于HAAM 上；培養(yǎng)1 ～ 5 d，MTT 檢測示實驗組和對照組吸光度值比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。移植術(shù)后1、2、4 周，A 組創(chuàng)面愈合率均高于B、C 組，B 組高于C 組，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。HE染色示A 組創(chuàng)面愈合速度快于B、C 組；A 組CK19 表達亦明顯高于B、C 組。 結(jié)論 HAAM 復(fù)合ADSCs 構(gòu)建真皮替代物對大鼠全層皮膚損具有良好的促愈合作用。
目的 探討應(yīng)用生長分化因子5（growth differentiation factor 5，GDF-5）誘導脂肪干細胞（adiposederived stem cells，ADSCs）成軟骨細胞分化的可能性及效果。 方法 3 月齡清潔級健康日本大耳白兔6 只，雌雄不限，體重2 ～ 3 kg。取兔皮下脂肪4 ～ 6 mL，采用膠原酶消化離心貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)ADSCs，取第3 代細胞進行實驗。波形蛋白免疫組織化學和CD44、CD49d、CD106 免疫熒光染色鑒定ADSCs。調(diào)整細胞密度為1 × 106 個/mL，分別用普通細胞培養(yǎng)液以及含0、10 、100 ng/mL GDF-5 的軟骨細胞誘導液誘導培養(yǎng)。倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化；MTT 法檢測細胞增殖情況；RT-PCR 檢測誘導細胞Col Ⅱ和蛋白多糖mRNA 的表達；免疫組織化學、阿利新藍染色、甲苯胺藍染色和Western blot 法檢測誘導細胞Col Ⅱ和蛋白多糖表達。 結(jié)果 ADSCs 呈小圓形、梭形、多角形分布，表面抗原標志CD44、CD49d 呈陽性表達，CD106 和波形蛋白呈陰性表達。100 ng/mL GDF-5 誘導的ADSCs 呈圓形或類圓形，且細胞增殖旺盛。普通培養(yǎng)液和0、10、100 ng/mL GDF-5 成軟骨細胞誘導培養(yǎng)后7 d，Col Ⅱ、蛋白多糖 mRNA 表達均呈濃度依賴性增加，除0、10 ng/mL GDF-5 兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）外，其余各組差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；100 ng/ mL GDF-5 誘導培養(yǎng)14 d，Col Ⅱ、蛋白多糖mRNA 以及蛋白表達達高峰，阿利新藍、甲苯胺藍染色以及Col Ⅱ免疫組織化學染色均呈陽性。 結(jié)論 經(jīng)一定濃度的GDF-5 誘導的ADSCs，Col Ⅱ和蛋白多糖表達明顯增加，具有軟骨細胞的部分生物學功能。