哺乳類動(dòng)物的視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞包括視桿細(xì)胞和視錐細(xì)胞。這兩種細(xì)胞的數(shù)量在視網(wǎng)膜中按一定比例和特定的空間分布，其分化發(fā)育的時(shí)間存在明顯差異，視錐細(xì)胞的發(fā)育早于視桿細(xì)胞。兩種細(xì)胞均來(lái)源于具有同一多向分化潛能的視網(wǎng)膜光感受器前體細(xì)胞，在光感受器細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用下分化為不同的光感受器細(xì)胞亞型。這一分化過(guò)程主要受7種重要的轉(zhuǎn)錄因子所調(diào)控。深入了解這些轉(zhuǎn)錄因子對(duì)視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞分化的功能和調(diào)控機(jī)制，將有助于我們對(duì)視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞分化過(guò)程中關(guān)鍵機(jī)制的全面理解。
目的 觀察黃斑中心凹光感受器局部缺損對(duì)視力的影響。方法 經(jīng)頻域光相干斷層掃描（SD-OCT）檢查發(fā)現(xiàn)黃斑中心凹光感受器局部缺損的患者（光感受器局部缺損組）31例31只眼和年齡、屈光度匹配的正常人（正常對(duì)照組）30名30只眼納入研究。光感受器局部缺損組31只眼中，黃斑中心凹光感受器全層缺損22只眼（全層缺損組），光感受器外節(jié)缺損9只眼（外節(jié)缺損組）。所有受檢者均行最佳矯正視力（BCVA）、裂隙燈顯微鏡、直接檢眼鏡和SD-OCT檢查。獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較光感受器局部缺損組與正常對(duì)照組之間平均黃斑區(qū)中心凹視網(wǎng)膜厚度（CFT）之間的差異；光感受器內(nèi)外節(jié)全層缺損和外節(jié)缺損患者平均最小分辨角對(duì)數(shù)視力（logMAR）BCVA、平均CFT、平均光感受器缺損最大寬度、平均缺損面積、平均光感受器缺損最大高度及平均殘余視網(wǎng)膜厚度之間的差異。結(jié)果 光感受器局部缺損組、正常對(duì)照組平均CFT分別為（225.32plusmn;19.70）、（240.02plusmn;10.70） mu;m，兩組平均CFT比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=-1.96，P＞0.05）。全層缺損組、外節(jié)缺損組平均logMAR BCVA分別為0.22plusmn;0.31、0.32plusmn;0.43；平均CFT分別為（224.09plusmn;20.57）、（228.33plusmn;18.17） mu;m；平均光感受器缺損最大寬度分別為（131.32plusmn;108.18）、（143.22plusmn;66.93） mu;m；平均缺損面積分別為（0.022plusmn;0.054）、（0.019plusmn;0.019）mm2；平均光感受器缺損最大高度分別為（77.41plusmn;6.62）、（44.89plusmn;4.26） mu;m；平均殘余視網(wǎng)膜厚度分別為（87.00plusmn;20.31）、（128.33plusmn;23.54） mu;m。兩組患者在平均logMAR BCVA、平均CFT、光感受器缺損最大寬度、缺損面積之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-0.76、-0.538、-0.305、0.166，P＞0.05）；平均光感受器缺損最大高度、平均殘余視網(wǎng)膜厚度之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.72、-4.91，P＜0.05）。光感受器缺損最大寬度、缺損面積與BCVA呈負(fù)相關(guān)（t=-0.529、-0.494，P＜0.05）。結(jié)論 黃斑中心凹光感受器局部缺損可造成視力下降，缺損范圍越大，視力下降越明顯。
目的 探討在體電穿孔輔助基因轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞層和光感受器（PR）細(xì)胞層的可行性。方法 147只健康雄性Spragne-Dawley(SD)大鼠根據(jù)電穿孔刺激模式電壓值分為5、10、15、20、25、30、35 V組，右眼視網(wǎng)膜下腔注射增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFPN1為實(shí)驗(yàn)眼，左眼注射TE Buffer 為對(duì)照眼。各組根據(jù)不同轉(zhuǎn)染方向再分為RPE和PR兩個(gè)亞組。各組除電壓不同外，其余參數(shù)均為脈寬99 ms，脈沖間期0.5 s，連續(xù)5個(gè)脈沖。將帶有負(fù)電荷的質(zhì)粒在電場(chǎng)作用下，擬轉(zhuǎn)染到RPE細(xì)胞層，反向置電極，擬轉(zhuǎn)染到PR細(xì)胞層。轉(zhuǎn)染后7 d 取各組視網(wǎng)膜鋪片，熒光顯微鏡下觀察EGFP表達(dá)強(qiáng)弱、范圍及熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)分析；采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）、實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）半定量觀察EGFP蛋白和mRNA的表達(dá)。結(jié)果 轉(zhuǎn)染后7 d，熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，各組RPE亞組對(duì)照眼RPE細(xì)胞層內(nèi)均未見(jiàn)特異性熒光表達(dá)，實(shí)驗(yàn)眼可見(jiàn)綠色熒光表達(dá)；各組RPE亞組對(duì)照眼視網(wǎng)膜鋪片均未見(jiàn)熒光表達(dá)，實(shí)驗(yàn)眼視網(wǎng)膜鋪片均可見(jiàn)轉(zhuǎn)染了EGFP的RPE細(xì)胞。Western blot檢測(cè)顯示，隨電壓增加，EGFP蛋白與beta;-肌動(dòng)蛋白條帶灰度相對(duì)比值呈上升趨勢(shì)。RT-PCR檢測(cè)顯示，各組均產(chǎn)生陽(yáng)性擴(kuò)增條帶，隨電壓增高，EGFP mRNA與GADPH mRNA擴(kuò)增條帶灰度相對(duì)比值逐漸增高。結(jié)論 在體電穿孔方法可以有效輔助基因轉(zhuǎn)染大鼠RPE細(xì)胞層。
目的 觀察外源性促紅細(xì)胞生成素（EPO）對(duì)大鼠視網(wǎng)膜脫離（RD）狀態(tài)下光感受器細(xì)胞的保護(hù)作用。方法 采用計(jì)算機(jī)產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)字的方法將162只正常雄性SD大鼠分為正常對(duì)照組（NC組）、RD組、RD+磷酸鹽緩沖液（PBS）組、RD+EPO 100、200、400 ng組。RD后3 d，采用蛋白免疫印跡（Western blot）檢測(cè)半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性和B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-XL(bcl-XL)的表達(dá)，免疫熒光檢測(cè)caspase-3活性，脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測(cè)光感受器細(xì)胞凋亡情況。RD后14、28 d，2個(gè)月，視網(wǎng)膜組織病理學(xué)觀察并測(cè)量外核層（ONL）厚度。結(jié)果 Western bolt檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，各組間活化caspase-3條帶灰度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=35.96, P＜0.01），bcl-XL條帶灰度值差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=30.75, P＜0.01）。免疫熒光和TUNEL檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，caspase-3免疫陽(yáng)性光感受器細(xì)胞數(shù)目與TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞核趨勢(shì)表現(xiàn)一致。RD后14 d、2個(gè)月，各組間ONL差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=21.52，96.25；P＜0.01）。結(jié)論 RD后補(bǔ)充外源性EPO可通過(guò)抑制caspase-3活性并增加bcl-XL的表達(dá)拮抗凋亡，從而發(fā)揮對(duì)光感受器細(xì)胞的保護(hù)作用。
視網(wǎng)膜重構(gòu)是指各種原因?qū)е碌墓飧惺芷髯冃?、死亡，隨后視網(wǎng)膜上所有神經(jīng)元和非神經(jīng)元細(xì)胞發(fā)生一系列病理改變，最終視功能完全喪失的一系列視網(wǎng)膜組織變化過(guò)程；以視網(wǎng)膜神經(jīng)元死亡、細(xì)胞遷移和微神經(jīng)瘤的形成，視覺(jué)信號(hào)去傳入阻滯，產(chǎn)生異常的視覺(jué)輸入為特征。認(rèn)識(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)元重構(gòu)時(shí)結(jié)構(gòu)、微環(huán)境和電生理變化的過(guò)程，闡明變性視網(wǎng)膜突觸重構(gòu)的機(jī)制，將為中晚期替換壞死或凋亡的細(xì)胞，挽救和恢復(fù)視功能的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
目的:觀察川芎嗪對(duì)視網(wǎng)膜色素變性rds小鼠的干預(yù)作用和機(jī)制。 方法:rds新生小鼠 84只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組42只小鼠。實(shí)驗(yàn)組小鼠從出生時(shí)開(kāi)始，腹腔注射鹽酸 川芎嗪80 mg/kg，2次/d，直至生后35 d；對(duì)照組同時(shí)注射等量生理鹽水。分別在用藥 后0、3、7、1 4、21、28、35 d取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠眼球，立即經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)病理切片。另取眼球經(jīng)2.5%戊二醛溶液固定，電子顯微鏡觀察。用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口標(biāo) 記技術(shù)(TUNEL)方法檢測(cè)視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的凋亡，用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定bcl-2在視網(wǎng)膜的表達(dá)。 結(jié)果:病理觀察結(jié)果顯示，經(jīng)鹽酸川芎嗪治療后14、21、28 、35 d，rds小鼠光感 受器細(xì)胞核層數(shù)與未用藥的對(duì)照組相比較，明顯增加（P＜0.01）。電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示，川芎嗪可減緩rds小鼠光感受器細(xì)胞和視網(wǎng)膜外段盤(pán)膜部位線粒體的病變，減少盤(pán)膜和外界膜的破壞。rds小鼠經(jīng)鹽酸川芎嗪治療后3、7、14、21、28、35 d，光感受器細(xì)胞凋 亡率比對(duì)照組明顯減少（P＜0.01）；治療后3、7、14、21、28、35 d時(shí)，bcl -2在視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞及光感受器細(xì)胞內(nèi)外段的表達(dá)明顯增強(qiáng)（P＜0.05） 。 結(jié)論:鹽酸川芎嗪可延緩rds小鼠視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的減少，其作用機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)視網(wǎng)膜 外核層及光感受器細(xì)胞內(nèi)外段bcl-2的表達(dá)延緩rds小鼠視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的凋亡。
目的 觀察人眼后極部視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞分布特征，探討其細(xì)胞密度隨離心度變化的規(guī)律以及與視敏度的關(guān)系。 方法 取20個(gè)鉆取角膜后剩余的眼杯，固定，進(jìn)行視網(wǎng)膜鋪片，用微分干涉顯微鏡觀察后極部視網(wǎng)膜細(xì)胞形態(tài)和密度，首先觀察光感受器細(xì)胞內(nèi)節(jié)，以中央凹為始點(diǎn)向顳側(cè)周邊逐漸推進(jìn)。 結(jié)果 視錐細(xì)胞最高密度位于中央凹，細(xì)胞密度范圍134 000~267 000個(gè)/mm2，細(xì)胞平均數(shù)為198 090 個(gè)/mm2。細(xì)胞密度個(gè)體差異［CV值(標(biāo)準(zhǔn)差／均數(shù))表示］極大，CV值為18.2%，從中央凹向外細(xì)胞密度及個(gè)體差異均迅速減少。視桿細(xì)胞高密度區(qū)約位于離心度4 mm左右，細(xì)胞密度最高值范圍72 610~182 350/mm2，3~5 mm之間細(xì)胞保持高密度。 結(jié)論 光感受器細(xì)胞內(nèi)節(jié)單層排列，其計(jì)數(shù)可反映細(xì)胞的絕對(duì)值。中央凹極高視錐細(xì)胞密度為提供敏銳中心視力的基礎(chǔ)，其極大的個(gè)體差異與發(fā)育有關(guān)。視桿細(xì)胞桿體在離心度4 mm左右存在高密度帶，此高密度帶的存在是此處視網(wǎng)膜有較好暗視力的基礎(chǔ)。
目的 研究小鼠實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜脫離后光感受器細(xì)胞的凋亡情況。 方法 將成年C57Bl/6J小鼠36只分為2組：實(shí)驗(yàn)組小鼠18只左眼視網(wǎng)膜下注射1.4%透明質(zhì)酸鈉造成視網(wǎng)膜脫離，對(duì)照組小鼠18只左眼僅作鞏膜穿刺。分別于手術(shù)后1、3、7和28 d摘除眼球，視網(wǎng)膜切片進(jìn)行組織化學(xué)、免疫熒光染色，共聚焦顯微鏡檢查?？挂曞F和抗視桿細(xì)胞的抗體分別標(biāo)記視錐和視桿細(xì)胞，dUTP缺口末段標(biāo)記法(TUNEL)標(biāo)記凋亡細(xì)胞。通過(guò)計(jì)數(shù)存活和凋亡的視錐和視桿細(xì)胞來(lái)定量光感受器細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞丟失。 結(jié)果 凋亡細(xì)胞只存在于脫離部分視網(wǎng)膜的外核層，凋亡細(xì)胞在視網(wǎng)膜脫離后1 d即可檢測(cè)得到，3 d時(shí)達(dá)到高峰，7 d后陡然減少。視網(wǎng)膜脫離后視桿和視錐細(xì)胞的死亡呈現(xiàn)同樣的時(shí)程。 結(jié)論 凋亡是視網(wǎng)膜脫離后光感受器細(xì)胞死亡的主要病理改變。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 124-127)
目的 觀察視網(wǎng)膜下芯片所引起的光感受器損傷及正常兔眼的電生理改變。 方法 青紫藍(lán)兔共30只，其中22只兔NaIO3生理鹽水溶液靜脈 注入后眼光感受器受到損傷。將一個(gè)由90個(gè)微光電二極管組成的陣列和相連電極構(gòu)成的直徑約3mm的芯片通過(guò)鞏膜切口植入4只正常及22只注藥后光感受器損傷兔右眼的視網(wǎng)膜下腔或脈絡(luò)膜中，左眼為對(duì)照眼 ；分別檢測(cè)芯片眼及對(duì)照眼局部閃光視覺(jué)誘發(fā)電位（F-VEP）、局部閃光視網(wǎng)膜電圖（F-ERG）、全視野閃光VEP及全視野閃光ERG。另外4只兔雙眼摘作病理檢查。 結(jié)果 22只色光感受器損傷兔中有11只芯片眼的局部ERG主波振幅明顯大于對(duì)照眼；4只正常兔中，2只芯片眼的局部ERG主波振幅大于對(duì)照眼。1只芯片眼表面視網(wǎng)膜出現(xiàn)破孔不能引出任何波。局部VEP及全視野閃光VEP重復(fù)性較差，全視野閃光ERG未見(jiàn)明確差別。 結(jié)論 植入的芯片在受到光刺激 后可刺激局部視網(wǎng)膜并引起局部視網(wǎng)膜的電活動(dòng)。 (中華眼底病雜志, 2006, 22: 324-327)